二烯丙基二硫对高脂血症大鼠的降血脂效果和机制研究

作     者：王琼 

作者单位：山东大学 

学位级别：硕士

导师姓名：谢克勤

授予年度：2019年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：二烯丙基二硫 高脂血症 抗氧化作用 降血脂作用 Keap1/Nrf2 

摘      要：研究目的高脂血症(Hyperlipidemia)是由于脂肪转运或代谢异常所致血浆或血清中一种或者多种脂质高于正常范围的全身性疾病,具体表现为总胆固醇(Total Cholesterol,TC)和/或甘油三酯(Triglyceride,TG)异常升高。心血管病(CVD,Cardiovascular Diseases)是由于心脏和血液循环障碍引起的一种多因素疾病,是全球死亡的首要原因,高脂血症是其重要诱因之一。对高脂血症的有效治疗,可以减少CVD的发病率和死亡率。目前临床高脂血症多用他汀类降脂药物治疗,但由于他汀类降脂药物长期服用可对人体产生横纹肌溶解症、肝毒性等毒副作用,因此寻找新的安全有效降脂药物具有重要意义。大蒜是百合科葱属植物蒜的鳞茎,有研究表明大蒜及其提取物具有抗菌、抗病毒、降血压、降血脂,防治动脉粥样硬化等多种生物学功效。大蒜油含有二烯丙基一硫(Diallyl sulfide,DAS)、二烯丙基二硫(Diallyl disulfide,DADS)和二烯丙基三硫(Diallyltrisulfide,DATS)等多种有机硫化合物活性物质,但其中具有降血脂作用的单体成分尚不明确。第一部分实验,根据国家食品药品监督管理局以国食药监保化[2012]107号最新发布的《辅助降低血脂功能检验方法》,通过饲喂Wistar大鼠高脂饲料建立高脂血症模型,研究对比了大蒜的三种单体成分DAS、DADS和DATS,发现DADS具有良好的降血脂作用,但其作用和机制尚不明确并未见报道。第二部分实验,建立相同高血脂模型,探讨DADS的降血脂作用及其机制,分别给予低、中、高三种剂量DADS干预,通过相关血脂和肝脏指标评价其干预效果;并进一步分别从代谢和分子生物学角度对DADS发挥作用的机制进行探讨,为高脂血症的预防和治疗提供科学实验依据,也为大蒜制品DADS的进一步开发和利用提供理论依据。第一章DAS、DADS、DATS和大蒜油对高脂血症大鼠降血脂的效果评价和比较研究方法1.高脂饲料维持饲料中添加20.0%蔗糖、15.0%猪油、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠,另加入1.2%磷酸氢钙、0.8%石粉和5.0%酪蛋白达到维持饲料的国家标准。2.实验动物及处理健康雄性Wistar大鼠200±20g,70只,适应性喂养7天后,观察其一般状态,并按体重随机分为溶剂对照组10只,实验组60只;溶剂对照组给予正常饲料,实验组给予高脂饲料。一周后,实验组根据血清TC水平,随机分为高脂模型组、高脂+DAS干预组(160mg/***)、高脂+DADS干预组(60mg/***)、高脂+DATS干预组(40mg/***)、高脂+大蒜油干预组(100mg/***)和高脂+辛伐他汀对照组(4mg/***)。DAS、DADS和DATS分别用花生油稀释,溶剂对照组及高脂模型组给予等体积花生油,灌胃体积为1ml/***,经口灌胃,1次/天,持续4周。处死动物,迅速低温剥离肝脏,称重后剪取肝脏左叶相同部位作为标本用于制备匀浆和油红O染色,其余肝脏备用,均冻存于-80℃冰箱。3.体重和食物利用率测定实验期间,每周称量一次体重,调整灌胃剂量。以周为单位,记录饲料摄入量并按下列公式计算食物利用率:每周食物利用率=平均每只动物每周食物摄入量(g)/该周体重增长量(g)× 100%。4.肝脏系数测定称量动物末次体重及肝脏质量,按照下列公式计算肝脏系数:肝脏系数=肝脏质量(g)/末次体重(g)×1005.血清生化指标测定断头处死大鼠后取血3500 r/min室温离心15min分离血清,全自动生化仪测定TC、TG、HDL-C和LDL-C含量。6.肝脏TG和TC含量测定减量称重法分别称取肝脏左叶相同部位50mg和100mg肝组织,按照试剂盒要求检测TG和TC浓度,BCA法测定肝脏组织匀浆中的总蛋白浓度校正。7.肝脏油红O染色取肝左叶相同部位肝组织,制备10μm冰冻切片。观察脂滴在肝脏内的分布范围和面积,Image-ProPlus 6.0软件分析油红O染色脂滴所占面积比[面积比=脂滴面积/切片面积× 100%]。研究结果1.实验动物体重及肝脏系数变化与溶剂对照组相比,高脂模型组体重无明显差异;与高脂模型组相比,DAS、DADS、DATS和大蒜油各干预组体重也无明显差异。与溶剂对照组相比,高脂模型组肝脏系数无明显差异;与高脂模型组相比,DAS、DADS、DATS和大蒜油各干预组肝脏系数无明显差异。2.实验动物食物利用率变化与高脂模型组相比,给药期间大蒜油干预组动物总食物利用率下降14.81%(P0.05),其余各组无明显差异。3.实验动物血清脂质相关指标变化与溶剂对照组相比,高脂模型组血清TC,TG,LDL-C浓度分别上升76.57%、115.16%和43.40%(P0.01)。与