口腔鳞癌ANXA1表达与TPF诱导化疗疗效的机制研究

作     者：孙文文 

作者单位：上海交通大学 

学位级别：硕士

导师姓名：钟来平

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：ANXA1 口腔鳞状细胞癌 TPF诱导化疗 生物标志物 

摘      要：目的:课题组前期实验发现膜联蛋白Al(Annexin A1,ANXA1)的表达与口腔鳞癌的发生发展有关,回顾性研究发现局部晚期口腔鳞癌低中分化且ANXA1低表达的患者可从TPF(T=多西他赛,P=顺铂,F=5-氟尿嘧啶)诱导化疗中获益,但是具体机制尚不明确,本研究主要目的一是通过干预ANXA1的表达,探索ANXA1在口腔鳞癌发生发展中的作用,二是探索口腔鳞癌细胞中ANXA1的表达与细胞对TPF诱导化疗药物的敏感性的关系,旨在阐明ANXA1可作为口腔鳞癌TPF诱导化疗疗效的生物标志物潜在的机制。方法:1.应用siRNA干扰技术和基因克隆DNA重组技术检测口腔鳞癌细胞中ANXA1的表达水平对细胞的增殖、细胞周期的影响;2.通过Western blot方法检测ANXA1表达对细胞中EGFR/PI3K/Akt信号通路中相关蛋白磷酸化水平的影响;3.通过CCK8检测口腔鳞癌细胞系干预ANXA1的表达后对docetaxel、cisplain、5-fluorourcial药物敏感性的变化,Western blot方法检测TPF药物分别处理后细胞中凋亡蛋白水平的表达情况,用GraphPad Prism 5.0软件分析结果,P0.05有统计学差异;结果:***1的表达水平下调促进了口腔鳞癌细胞(HB96和HN4)的增殖,细胞周期中S期比例增加;ANXA1过表达后抑制了口腔鳞癌细胞(CAL27)的增殖,细胞周期中S期比例下降;***1表达下调后EGFR蛋白的磷酸化水平上调,与EGFR/PI3K/Akt信号通路相关蛋白EGFR、Akt、PKD1、c-Raf的磷酸化水平上调,p27kip的表达水平下降,而CAL27细胞中的ANXA1表达水平上调后,EGFR/PI3K/Akt信号转导相关的蛋白磷酸化水平下降,p27kip的表达水平增加;3.与对照组比,干扰HN4和HB96细胞中ANXA1的表达后,细胞对多西他赛、顺铂、5-氟尿嚼啶更敏感,细胞中cleaved PARP和cleaved caspase-3的表达水平明显上调。CAL27细胞中ANXA1过表达后,和对照组相比,细胞对多西他赛、顺铂、5-氟尿嘧啶的敏感性下降,细胞中cleaved PARP和cleaved caspase-3的表达水平也下降;结论:***1在口腔鳞癌中通过抑制EGFR/PI3K/Akt通路抑制细胞周期和细胞的增殖;***1表达的高低与口腔鳞癌细胞株对TPF化疗药物的敏感性有关;ANXA1表达通过影响TPF药物促细胞凋亡的能力影响细胞的敏感性;***1具有作为预测TPF诱导化疗效果的预测性生物标志物的潜能。