KDM2B调控let-7b表达影响卵巢癌细胞增殖迁移的实验研究

作     者：蒙家华 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：况燕

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：赖氨酸特异性脱甲基酶2B Let-7b 表观调控 卵巢癌 

摘      要：目的检测KDM2B基因改变是否影响let-7b的表达,以及KDM2B基因改变对卵巢癌细胞A2780/SKOV3细胞株生物学行为的影响,明确KDM2B与Let-7b表达的相关性。方法构建包装KDM2B沉默及过表达的慢病毒载体,并感染卵巢癌A2780、SKOV3细胞,嘌呤霉素筛选能稳定表达目的基因的稳转细胞株;慢病毒感染细胞72小时后,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测感染后KDM2B基因mRNA及蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测KDM2B基因沉默及过表达后let-7b mRNA的表达情况;采用CCK8、划痕、Transwell小室检测KDM2B沉默及过表达后对卵巢癌A2780/SKOV3细胞增殖及迁移的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;染色质免疫共沉淀法探讨KDM2B调控let-7b的机制。结果成功构建KDM2B沉默和过表达慢病毒载体,筛选后的稳转细胞株可达到后续实验要求;KDM2B负调控let-7b的表达,KDM2B上调能明显抑制let-7b的表达,提高卵巢癌A2780/SKOV3细胞的增殖及迁移能力,促进细胞周期进程并抑制细胞凋亡;KDM2B沉默则可解除其对let-7b的抑制作用,let-7b的表达明显升高,细胞增殖及迁移能力减弱,并能抑制细胞周期进程,使细胞显著阻滞于G0/G1期,且细胞凋亡率明显增加;KDM2B上调使与let-7b结合的组蛋白的甲基化及RNA聚合酶Ⅱ与let-7b的结合均明显减少。结论KDM2B基因可直接与let-7b结合,使let-7b上的组蛋白去甲基化,并干扰RNA聚合酶Ⅱ与let-7b结合,抑制let-7b的转录,从而促进卵巢癌的发生发展。