黄连生物碱的色谱分离与黄连组分的活性研究

作     者：张华蓉 

作者单位：湖北民族大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王联芝;郭志谋

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：黄连 生物碱 分离纯化 毒蕈胆碱受体 激动活 

摘      要：黄连是一味传统中草药,现代药理研究表明,黄连是碱性药物的重要来源,在糖尿病、肿瘤等疾病的治疗方面具有较好的功效。黄连中的主要药效成分为生物碱,其在色谱分离及纯化制备中存在峰易拖尾及载样量低等问题,这些技术难点制约了黄连的物质基础研究及其在医药界的发展。为了解决这些问题,本论文以实验室自主研发的带电荷C18HCE色谱柱,建立了基于表面静电排斥/反相混合模式色谱的黄连生物碱分析方法。实现了黄连中主要生物碱在色谱分析上的对称峰形和分离选择性,结合质谱对分离出的6个主要色谱峰进行了归属,分别为黄连碱、药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀,并对湖北、重庆两地不同批次的黄连药材进行了生物碱的定量分析,结果显示不同产地不同批次的黄连中生物碱的含量差异较大。在优化了黄连生物碱的高效液相色谱分析方法的基础上,以高效制备液相色谱技术、并结合膜分离技术,建立了黄连总生物碱的纯化制备方法。在此方法下,黄连总生物碱的纯度从39.62%提高到88.87%,总生物碱的回收率可达94.5%,所得产品在颜色上有了很大的改善。对制备所得馏分进行了D2、Mu、M3、5-HT2A、GPR120、FFA1等受体的活性测试实验,结果显示,馏分Fr.1表现出特异的毒蕈胆碱受体(M3)激动活性,这一活性筛选结果在黄连活性研究方面未见报道。以此为基础,展开了以M3激动活性为导向的馏分Fr.1纯化制备工作,目前得到了两个还需继续纯化的二维馏分。本论文解决了黄连生物碱在液相色谱上的分析、分离纯化难点,可实现黄连生物碱在液相色谱上的优异峰形和选择性,可使黄连总生物碱的纯度从39.62%提高到88.87%。筛选得到了表现出毒蕈胆碱受体(M3)激动活性的组分。这些实验结果为黄连的研究提供了新颖的分离分析和纯化制备方法,对黄连的物质基础和药理活性研究具有重要的意义。同时,也可为其它碱性化合物的研究提供一定的参考。