左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠下丘脑—垂体—肾上腺轴的调控机制

作     者：秦臻 

作者单位：辽宁中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：任艳玲

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：左归丸 右归丸 阴阳互济 HPA轴 PMOP 

摘      要：目的:本研究基于中医学“阴阳互济理论,以下丘脑-垂体-肾上腺轴为切入点,检测左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠下丘脑、肾上腺TGF-β1、PKA蛋白表达的影响,对绝经后骨质疏松症模型HPA轴的失衡进行解析,从多系统联动角度寻找中医药防治PMOP中“左归丸补其形损,右归丸固其气化的实验依据。材料与方法:SPF级雌性未生育2月龄SD大鼠95只,体重20020g,按体重采用分层随机分组方法分为正常对照10只,假手术组10只,去卵巢组75只。模型组大鼠手术切除双侧卵巢组织,制备PMOP模型,假手术组大鼠手术切除双侧卵巢组织周围等体积脂肪组织。造模7d后,将术后存活者(70只)按体重分层随机分为7组,最后90只大鼠共分为9组,即正常(Control)组,假手术(SHAM)组,模型(OVX)组,补佳乐(BJL)组,左归丸(ZGW)组,右归丸(YGW)组,共同药(GTY)组,滋阴药(ZYY)组,补阳药(BYY)组,每组10只。分组后开始给药治疗,按每公斤大鼠给药量为人的6.3倍计算,中药自制成生药量为1g﹒ml水煎剂,阳性对照药戊酸雌二醇片(补佳乐)碾成粉末,溶入蒸馏水中搅拌均匀制成混悬液,各治疗组灌服对应药物,Control组、SHAM组和OVX组均灌服等体积(2ml)的蒸馏水,灌胃饲养期间,每月为大鼠称重1次,并根据称量体重重新调整灌胃量。经过12w中药灌胃干预,除去造模、饲养期间因手术、灌胃等原因死亡的大鼠,最终共纳入84只大鼠,取材检测相应指标。取材前24h大鼠禁食不禁水,末次给药2h后称量体重并做记录,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,腹主动脉取血,静置2h后,1000rpm离心10min,取上层血清,于-80℃冻存,采用放射免疫法检测血清ACTH、COR含量;取大鼠腰椎,剔除骨骼上附着的软组织,用生理盐水浸润的纱布包裹,于-80℃冻存,采用双能X线骨密度检测仪监测大鼠腰椎骨密度;取大鼠下丘脑和肾上腺,于-80℃冻存,用蛋白印迹法分别检测TGF-β1、PKA蛋白的表达。结果:1.左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠腰椎骨密度的影响各组大鼠腰椎骨密度检测结果如下:给药治疗12w后,与Control组比较,SHAM组、BJL组和ZGW组骨密度相当,无显著性差异(P0.05),OVX组、YGW组及拆方组骨密度降低,差异极显著(P0.05),YGW组及拆方组骨密度降低,差异极显著(P0.05),OVX组、BJL组、ZGW组、GTY组、ZYY组COR含量降低,差异显著(P0.05);与ZGW组比较,YGW组、BYY组血清COR含量升高,差异显著(P0.05)。各组大鼠血清ACTH的检测结果如下:与Control组比较,SHAM组、YGW组及BYY组血清ACTH含量相当,无显著性差异(P0.05),OVX组、BJL组、ZGW组、GTY组、ZYY组ACTH含量降低,差异显著(P0.05),ZGW组、YGW组、BYY组ACTH含量升高,差异显著(P0.05);与ZGW组比较,GTY组血清ACTH含量降低,差异显著(P0.05)。3.左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾上腺TGF-β1、PKA蛋白表达的影响各组大鼠肾上腺组织TGF-β1蛋白表达检测结果如下:与Control组比较,SHAM组、BJL组、ZGW组、YGW组、ZYY组、BYY组肾上腺TGF-β1蛋白表达无显著性差异(P0.05),OVX组、GTY组表达升高,差异显著(P0.05),其余各组均低表达,差异显著(P0.05);与ZGW组比较,GTY组升高,