T3对妊娠早期母胎界面血管生长因子分泌的影响

作     者：倪懿 

作者单位：第四军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈必良;刘玉

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：甲状腺激素 3,5,3-三碘甲腺原氨酸 蜕膜基质细胞 细胞滋养细胞 血管内皮生长因子A 血管生成素-1 血管生成素-2 

摘      要：目的甲状腺激素(Thyroid hormones,TH)是由甲状腺合成分泌的酪氨酸的碘化物,主要包括四碘甲腺原氨酸(T4)和三碘甲腺原氨酸(T3)。甲状腺激素的生理作用十分广泛,是维持机体正常生长、发育不可缺少的激素。甲状腺疾病是常见的内分泌疾病,育龄期妇女是甲状腺疾病的高发人群。妊娠期生理变化增加甲状腺功能负担,甲状腺功能发生相应生理改变。而甲状腺功能异常所致的激素水平变化,进一步影响妊娠过程及胎儿发育,引起不良妊娠结局。流产是常见的妇产科疾病,大多数流产发生在妊娠期前三个月。大约50%流产与染色体异常(非整倍体)相关。然而,剩余50%的早期流产原因和机制知之甚少。有文献报道,血管发育障碍可能在流产的病理变化中扮演重要角色,其中大约70%的早期流产与母胎界面血管形成和血流量均减少相关。妊娠期甲状腺功能异常,尤其甲状腺功能减退、甲状腺素分泌减少与妊娠并发症之间的联系被广泛关注,流产是妊娠早期常见的并发症。已知血管生长因子分泌异常可以导致流产,但甲状腺功能异常引起流产的机制还不清楚,甲状腺素对母胎界面血管生成及发育和胎盘内分泌活动的影响了解甚少。因此假设,甲状腺功能异常可以改变母胎界面血管生长因子表达,以影响妊娠过程及结局。方法(1)于西京医院妇产科门诊治疗室采集自愿行人工流产术后获取的蜕膜和绒毛组织共12例,分别使用磁珠分离法分离蜕膜组织中的蜕膜基质细胞和Percoll梯度分离法分离绒毛组织的细胞滋养细胞,用兔抗催乳素抗体、小鼠抗波形蛋白抗体和兔抗角质蛋白7抗体,用细胞爬片免疫组化方法鉴定细胞,进行原代细胞培养。(2)活性炭吸附血清配备实验用完全培养基,无T3的活性炭吸附血清的0nMol/L设为对照组,活性炭吸附血清配制的完全培养基添加1 nMol/L、10 nMol/L、100 nMol/L三种浓度T3为实验组。使用QT-PCR方法和免疫组化方法进行VEGF-A、Ang-1和Ang-2的检测。结果(1)蜕膜基质细胞QT-PCR结果分析:在实验结果中,T3浓度不同,对蜕膜基质细胞VEGF-A、Ang-1和Ang-2的分泌有明显的影响。相对于活性炭吸附血清培养细胞的mRNA结果来说,1 nMol/L、10 nMol/L和100 nMol/L浓度的T3对于VEGF-A分泌,分别提高了1.063倍、4.014倍和1.801倍;对于Ang-1分泌,分别提高了3.445倍、9.151倍和7.246倍;对于Ang-2分泌,分别提高了1.083倍、3.966倍和11.393倍。组间mRNA含量差异明显。(2)蜕膜基质细胞免疫组化结果分析:各组不同浓度T3干预后的蜕膜基质细胞胞浆内均可见VEGF-A、Ang-1和Ang-2分泌,胞浆染色呈阳性。其中T3浓度增高,VEGF-A、Ang-1和Ang-2表达强度较低浓度T3,细胞内阳性染色明显。(3)绒毛细胞滋养细胞QT-PCR结果分析:在实验结果中,T3浓度不同,对绒毛细胞VEGF-A、Ang-1和Ang-2的分泌有明显的影响。相对于活性炭吸附血清培养细胞的mRNA结果来说,1 nMol/L、10 nMol/L和100 nMol/L浓度的T3对于VEGF-A分泌,分别提高了1.572倍、6.998倍和1.239倍;对于Ang-1分泌,分别提高了4.376倍、12.126倍和9.101倍;对于Ang-2分泌,分别提高了3.503倍、20.791倍和7.571倍。组间mRNA含量差异明显。(4)绒毛细胞滋养细胞免疫组化结果分析:各组不同浓度T3干预后的绒毛细胞滋养细胞胞浆内均可见VEGF-A、Ang-1和Ang-2分泌,胞浆染色呈阳性。其中T3浓度增高,VEGF-A、Ang-1和Ang-2表达强度较低浓度T3,细胞阳性染色明显。结论1.甲状腺素对蜕膜DSC细胞和绒毛CTB细胞的VEGF-A、Ang-1和Ang-2的分泌均有影响。2.甲状腺素可以增加蜕膜DSC细胞和绒毛CTB细胞的血管生长因子VEGF-A、Ang-1和Ang-2的分泌。3.蜕膜DSC细胞和绒毛CTB细胞血管生长因子VEGF-A、Ang-1和Ang-2的分泌依赖于甲状腺素浓度改变可引起。4.甲状腺功能减退引起流产,可能与蜕膜细胞和绒毛CTB细胞VEGF-A、Ang-1和Ang-2的分泌异常,血管形成障碍有关。