利用骨髄重构模型以及李斯特菌感染模型研究Tespa1在T细胞中的功能

作     者：蔡志斌 

作者单位：厦门大学 

学位级别：硕士

导师姓名：付国

授予年度：2017年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：T细胞发育 Tespal 骨髓重构 李斯特菌感染 

摘      要：T细胞是机体后天免疫系统的重要成员,在抗感染免疫、抗肿瘤免疫和自身免疫病中均发挥重要作用。T细胞在胸腺中完成发育后进入外周免疫器官发挥作用,这背后涉及到一系列复杂的调控机制。厘清T细胞在发育过程中和在外周免疫器官发挥免疫反应中的分子机制,有助于我们为临床抗感染和肿瘤免疫治疗中提供新的免疫干预靶点。近年来陆续发现一些新的分子在胸腺T细胞发育中发挥重要作用,其中Tespal是最近新报道的一个对T细胞发育具有重要作用的基因。Tespal分子的缺失会导致T细胞在发育过程中无法进行阳性选择,从而影响T细胞的发育,但是Tespal分子中影响T细胞发育的关键结构域仍不清楚。我们利用骨髓重构模型验证了 Tespal缺失会导致T细胞发育出现缺陷。在骨髓造血干细胞中回补Tespal分子能够恢复胸腺T细胞发育和外周T细胞比例,我们同时对Tespal中的两个氨基酸位点(Phe187以及Phe188)进行突变,研究发现,Tespal分子突变后尽管在T细胞比例上未见明显差异,但是在胸腺和外周T细胞数量上明显降低,提示Tespal的Phe187以及Phel88位点可能会影响T细胞的发育。为了进一步研究Tespal分子在外周T细胞中的功能,我们使用李斯特菌感染Tespal缺失的小鼠。李斯特菌是一种腐生性的革兰氏阳性菌,主要以食物为传染媒介,是最致命的食源性病原体之一。由于该菌是一种细胞内寄生菌,宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能,所以李斯特菌可以用来作为研究抗原特异性记忆性CD8+T细胞反应的模式病原体。为了研究Tespal在宿主抵抗病原体感染过程中的作用,本文利用李斯特菌分别感染野生型小鼠和Tespal缺失的小鼠,分析了初次免疫应答过程中CD8+T细胞的活化,CD8+T细胞细胞因子的产生,以及抗原特异性CD8+T细胞的分化。结果显示,在小鼠感染李斯特菌之后,Tespal缺失会使淋巴结CD8+T细胞的活化明显增强,但未影响细胞因子的分泌和抗原特异性CD8+T细胞的形成,通过对小鼠细菌清除能力的检测发现,Tespal分子的缺失并未影响小鼠的细菌清除能力。所以Tespal缺失对李斯特菌感染的初次免疫应答的影响较小。综上所述,Tespal缺失会导致T细胞的发育出现缺陷。进一步的研究表明,其影响胸腺T细胞发育的主要功能位点可能是Phe187以及Phe188位点。在李斯特菌感染模型中,Tespal缺失能够增强CD8+T细胞的活化,但并未明显影响细胞因子分泌,抗原特异性CD8+T细胞的形成,和小鼠的病菌清除能力。