金莲花总黄酮对大、小鼠脑缺血再灌注模型的药效机制研究

作     者：项丽玲 

作者单位：河南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：苗明三

授予年度：2018年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：金莲花总黄酮 缺血再灌注 MCAO模型 炎症级联反应 

摘      要：目的:研究金莲花总黄酮(FTTF)对反复脑缺血再灌注小鼠模型药效作用,以及对线栓法建立的大鼠MCAO模型氧化损伤及炎症级联反应和能量代谢的干预作用,以大鼠MCAO模型为主要研究路线,全面综合探究金莲花总黄酮对脑缺血再灌注损伤的作用规律及详细机理。方法:通过阻断两侧颈总动脉(CCA)15min后,使两侧CCA恢复灌流15min,再使其阻断15min,最后恢复灌流建立脑缺血反复再灌注小鼠模型。Sham组仅分离双侧CCA。Sham组、MCAO组给同体积0.5%CMC溶液,Nimodipine组、金莲花总黄酮大、中、小剂量组各自连续给药7d,1次/d,在第7d早上灌胃后1h造模,缺血再灌注22h取材监测血清NSE活性及S100β含量,以及脑部NO、NOS、ICAM-1、TGF-β1、TNF-α、IL-1β水平,并作病理以HE染色方式观察脑部皮质区损伤进程。通过线栓法建立大鼠MCAO模型,即用线栓由左侧颈总动脉(CCA)经颈内动脉(ICA)推进到大脑中动脉(MCA)里,2h后拔栓进行再灌注建立大鼠MCAO模型,Sham组仅露出左侧CCA,不插栓。Sham组、MCAO组给同体积0.5%CMC溶液,Nimodipine组、金莲花总黄酮大、中、小剂量组各自连续灌胃5d,1次/d,在第5d早上灌胃后1h进行MCAO术,缺血再灌注22h后,客观评定大鼠的NDS,即取材监测血清NSE、MPO活性,及脑部GSH-PX、CAT、MDA、ROS、Bcl-2、Casp-3水平,并以HE染色方式作病理,观看脑部皮质区及海马区损伤进程。金莲花总黄酮对MCAO大鼠模型造模方法及给药方式同实验2,缺血再灌注22h后,即取材监测脑部TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-кB、IL-10、ASP、GLU、VCAM-1、ICAM-1、ATPase及考马斯亮蓝水平,观测金莲花总黄酮对大鼠MCAO模型炎性反应及能量代谢影响。结果:小鼠反复脑缺血再灌注模型建立成功。与MCAO组比,FTTF各组均显著降低血清NSE活性及S-100β水平,降低脑匀浆里TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平及减弱NOS活性,并提升TGF-β1、NO水平,显著减轻脑部皮质区病理损伤状况。由NDS评定报告提示大鼠MCAO模型建立成功。与MCAO组比,FTTF剂量组均明显降低NDS分值及脑梗死体积(%),显著削弱血清中NSE、MPO活性,同时降低脑匀浆里MDA、ROS含量,显著增强GSH-PX、CAT活性,上调Bcl-2表达,抑制Caspase-3的含量上升,有效减轻脑部皮质区及海马区病理受损程度。由NDS评定报告提示大鼠MCAO模型建立成功。与MCAO组比,FTTF剂量组均明显降低大鼠脑匀浆中致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-кB、VCAM-1、ICAM-1及ASP、GLU的水平,有效提升抗炎因子IL-10的含量且显著增强ATPase酶活性。结论:根据金莲花总黄酮对小鼠反复脑缺血再灌注模型及线栓法建立的MCAO模型的干预结果提示:金莲花总黄酮可有效拮抗瀑布式炎症信号级联反应恶性进程,显著改善MCAO术后的神经缺失症状,较强拮抗TNF-α、IL-1β、IL-6表达,促进IL-10、TGF-β1释放,同时显著降低黏附分子的水平,抑制过氧化反应,调控ROS分泌,增强抗氧化酶活性,减轻细胞凋亡,有效控制炎症上游信号NF-кB的转录与表达,明显抑制胞内外EAA的过度分泌,增强对胞间隙的EAA再摄取,减轻Ca超载,增强脑内ATP调节与供应,改善脑氧代谢功能,使脑部免受缺血再灌注的损害。