鳄嘴花鲜药抗肾纤维化作用的实验研究

作     者：张洁帅 

作者单位：广州中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：钟希文

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：鳄嘴花 肾间质纤维化 阿霉素 α-SMA E-cadherin HK-2细胞 

摘      要：目的:基于观察体外TGF-β诱导的HK-2细胞损伤模型,并结合鳄嘴花新鲜药物对于阿霉素诱导的肾病综合征(NS)大鼠模型的治疗作用及其相应的作用机制,评价鳄嘴花鲜药对肾纤维化的保护作用,为鳄嘴花的临床应用和进一步开发提供实验依据。方法:主要分为两大部分展开研究:(1)鳄嘴花鲜榨汁(CN)对HK-2细胞抗增殖作用的实验研究a大鼠经CN提取物连续灌胃7天,于末次给药1 h后,采用腹主动脉采血,以制备含药血清。b取对数生长期的HK-2细胞进行分组,即细胞对照组、模型对照组、CN不同浓度组及含药血清高、中、低剂量组。除了空白对照组以外,其余各组均采用TGF-β造模,48 h后终止造模,所有组均加入与之相对应的药物,干预48 h后终止培养,随后采用CCK-8法检测细胞的存活率及生长状态。(2)CN药液对肾病综合征保护作用的药效作用及机制研究将大鼠按体重随机分组,即空白对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、CN高剂量组、CN中剂量组、CN低剂量组,每组10只。除空白对照组以外,其余各组通过尾静脉注射阿霉素的方法来建立大鼠肾病综合征模型,造模第5周开始给予药物干预。分别于给药第1、2、3、4、5周,分别检测大鼠的体重、24 h尿蛋白,并于给药5周后检测血清白蛋白、尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、钠、钾、氯及肾脏指数等相关作用的指标;之后留取肾脏组织标本,用于做光镜的检查及免疫组化,并应用Western blotting方法观察肾脏组织中α-SMA、E-cadherin蛋白含量的表达情况的变化。结果:(1)CN提取物含药血清及CN提取物直接给药均对HK-2细胞增殖有明显抑制作用。(2)模型对照组24 h尿白蛋白含量逐渐增加,血清总胆固醇、肌酐、尿素氮、甘油三酯的含量均有所升高,并于第5周达到高峰;血清白蛋白的含量有所下降,于第5周达到最低值。(3)给药后,模型对照组24 h尿白蛋白量逐渐升高,并于造模第4周达到高峰,同一时间点的醋酸泼尼松组、CN各剂量组明显低于模型对照组,与模型对照组相比较,24 h尿白蛋白,血清白蛋白,总胆固醇,尿素氮,甘油三酯,肌酐的含量变化有统计学意义。光镜下可见模型对照组有明显损伤,与模型对照组比较,CN各剂量组的肾损伤有所改善,给予CN的各剂量组的α-SMA蛋白水平均明显降低,CN高剂量组效果更佳,E-cadherin蛋白的表达显著升高。结论:1采用分两次尾静脉注射阿霉素的方法,可以成功地复制阿霉素肾病综合征模型,且所用时间较短,与人类肾病综合征表现更为接近。2鳄嘴花可以改善肾病综合征的高蛋白尿症状,减轻肾脏损伤,延缓肾病综合征肾小管上皮转分化肾间质纤维化的进程。3鳄嘴花可以通过上调肾组织中E-cadherin蛋白含量的表达,下调α-SMA蛋白水平,抑制肾病综合征大鼠肾脏肾小管上皮细胞分化,从而延缓肾间质纤维化。