大鼠呼吸道白念珠菌定植与鲍曼不动杆菌肺炎的关联性研究

作     者：朱嵩 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：谭筱江

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：白念珠菌 气道定植 鲍曼不动杆菌 跨界相互作用 IL-17 INF-γ 

摘      要：研究背景白念珠菌是最常见的条件致病真菌,约占机会性真菌感染的96%。由于定植于口鼻咽部的念珠菌及大气环境中的念珠菌,可随呼吸进入支气管及肺,所以呼吸道标本念珠菌培养阳性率较高。20%～55%的正常人痰液中可以分离出白念珠菌,重症监护病房(Intensive Care Unit,ICU)患者的阳性率更高,约为50%～70%。虽然呼吸道标本的白念珠菌检出率较高,但是多为白念珠菌定植而并非感染。国内外大量临床研究表明,下呼吸道白念珠菌定植可延长患者的ICU及总住院时间,增加医疗费用。迄今为止,呼吸道白念珠菌定植是否需要抗真菌治疗仍颇有争议。众所周知,鲍曼不动杆菌是引起院内感染及呼吸机相关性肺炎(Ventilator-associated pneumonia,VAP)的常见致病菌。2010 年中国 CHINET细菌耐药性监测网数据显示,我国10省市14家教学医院鲍曼不动杆菌占临床分离革兰阴性菌的16.11%,仅次于大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌。2009年国外的一篇报道称,鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率为36.8%,而我国更是高达50%以上。世界各地鲍曼不动杆菌耐药情况日益严峻。例如,一项针对耶路撒冷某教学医院10年时间里3536名患者的临床标本中鲍曼不动杆菌耐药率分析发现,1990年鲍曼不动杆菌对亚胺培南的敏感率98.1%,10年后也就是2000年时候已下降至64.1%。1992年,西班牙巴塞罗那一所医院爆发一起多重耐药鲍曼不动杆菌引起的医院内感染。2002年12月从中国台湾住院患者的呼吸道分泌物分离出一株全耐药鲍曼不动杆菌(Pandrug Resistant Acinetobacter baumannii,PDRA),具有不能分解乳糖的生化特征。2001年中国14家三级甲等教学医院的耐药监测数据显示,亚胺培南对鲍曼不动杆菌的抑菌率还保持在95%以上,其他类抗生素的抑菌率为45-69%,而到2007年耐药监测数据显示亚胺培南的抑菌率已经降到52.3%。鲍曼不动杆菌院内感染最常见的部位是肺部,是医院获得性肺炎(Hospital Acquired Pneumonia,HAP)常见致病菌,尤其在呼吸机相关肺炎(VAP)中占有极大的比例。VAP是机械通气过程中常见而又严重的并发症之一,患者一旦发生VAP,则易造成脱机困难,延长住院时间,增加住院费用,严重者甚至威胁患者生命。当前已有研究表明,念珠菌气道定植可增加铜绿假单胞菌VAP的发病率,而给予念珠菌气道定植患者抗真菌治疗可以降低铜绿假单胞菌感染的风险。提示在临床上真菌与细菌之间极可能存在着某种关联性。当前的研究表明,细菌-真菌之间的相互作用包含的机制至少有以下几个方面,例如,物理性相互接触包括细菌菌体与真菌菌体之间的直接接触,或者是细菌菌体与真菌体相互凝聚从而形成生物膜,或是通过群体信号感知系统、化学信号相互交流信息,亦或者是通过排出自身代谢反应产物调节环境PH值,或者直接影响宿主的免疫应答等方面。那么念珠菌气道定植与鲍曼不动杆菌肺炎之间是否也存在着某种关联性?目前院内鲍曼不动杆菌肺炎的发病率及死亡率居高不下,鲍曼不动杆菌肺炎的早期预防是解决这一问题的重要途径,所以当前进行白念珠菌气道定植与鲍曼不动杆菌肺炎之间的关系研究非常必要,同时也可为找到新的鲍曼不动杆菌肺炎治疗策略打下基础,这对改善患者预后及节约医疗资源均有极其重要的意义。为了进一步探讨下呼吸道念珠菌定植和细菌感染的相互关系,我们在哺乳动物中展开白念珠菌定植影响鲍曼不动杆菌肺炎发生的研究,以期对两者相互作用机制的探索及减少鲍曼不动杆菌肺炎发生的新方法有个重大突破。目的:1.研究大鼠白念珠菌气道定植与鲍曼不动杆菌肺炎之间的关联性;2.研究大鼠气道白念珠菌定植后的免疫应答反应;3.研究白念珠菌气道定植在大鼠对鲍曼不动杆菌免疫清除过程中的调理作用;4.研究白念珠菌对鲍曼不动杆菌毒力基因表达的调节作用。方法:1.建立白念珠菌气道定植模型1)健康清洁级雄性Wistar大鼠24只,体重250-275g。随机分为空白组、定植4小时组、定植24小时组、定植72小时组、定植7天组和定植14天组,每组n=4。2)除空白组外,所有大鼠均经气管插管向气道内滴注3×107CFU/ml白念珠菌悬液1OOul。空白组以等体积生理盐水代替白念珠菌悬液行气管内滴注。将实验大鼠按相应的时间点处死,取出肺脏称重并行菌落计数、肺组织病理切片苏木精-伊红染色检查、测定肺匀浆白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17),干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)的浓度。2.白念珠菌影响鲍曼不动杆菌所致大鼠肺部感染发生的动物实验1)取健康清洁级雄性Wistar大鼠36只,体重250-275g。随机