乳腺癌患者血清和组织中miR-494的表达及其临床意义

作     者：靳雪芹 

作者单位：江汉大学 

学位级别：硕士

导师姓名：卢忠心;镇鸿燕

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：微小RNA-494 乳腺癌 预后 VASH-2 

摘      要：目的:探讨miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系。方法:回顾性研究。用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测5种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7和1株乳腺上皮细胞系HBL-100中miR-494的表达水平;同时用qRT-PCR方法检测miR-494在54对乳腺癌组织和癌旁组织中的表达水平;用脂质体将miR-494表达质粒(pSIF-miR-494)和阴性对照组(pSIF空白载体)转染入乳腺癌细胞系MDA-MB-231后用划痕和侵袭实验Transwell)检测mi R-494对细胞迁移和侵袭力的影响;利用生物信息学软件预测miR-494的靶基因是VASH2,利用免疫印迹法(Western blot)检测miR-494对靶基因VASH2的抑制作用。结果:乳腺癌组织中miR-494的表达量为0.16±0.26,癌旁组织中miR-494表达量0.53±0.66,乳腺癌组织中miR-494的表达量明显低于癌旁组织(P0.01)。乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7)中miR-494的表达量相对正常乳腺上皮细胞明显降低(t值分别为212.9、37.73、27.53、10.61、19.46,P值均0.05)。在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中过表达miR-494后,划痕实验证明肿瘤细胞的迁移能力明显受到抑制;Transwell侵袭实验显示上调miR-494后肿瘤细胞穿过基质胶的平均数为(122±20)个;对照组为(598±24)个(P0.01);验证了过表达miR-494能够明显减弱乳腺癌细胞的侵袭能力。同样转染了miR-494表达质粒后能够显著抑制其靶基因VASH2的蛋白表达,Western blot结果显示阴性对照组蛋白相对灰度值为1.35±0.05,转染miR-494表达质粒组蛋白相对灰度值为0.64±0.07,过表达miR-494能够明显抑制VASH2蛋白表达(t=9.27,P0.05)。此外,miR-494在乳腺癌组织中的表达水平亦明显低于癌旁组织(t=5.80,P0.01),且与临床分期(χ2=17.41,P0.05)、组织病理分级(χ2=5.33,P0.05)、C-erbB-2表达情况(χ2=9.83,P0.05)、Ki-67阳性细胞百分比(χ2=6.13,P0.05)有关。结论:miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中低表达,且与乳腺癌临床分期和预后关系密切,可能成为乳腺癌辅助诊断和预后判断的新的分子标志。