草鱼主要寄生虫动态变化与水生态因子关系研究
作者单位：大连海洋大学
学位级别：硕士
导师姓名：吴淑勤;李华
授予年度：2014年
摘 要：草鱼（Ctenopharyngodon idellus）是一种重要的水产养殖鱼类，约占中国淡水鱼养殖总量的20%，然而，草鱼的病害较多，其中危害草鱼的寄生虫主要有：车轮虫、指环虫、斜管虫、小瓜虫、绦虫等。本文对草鱼集约化养殖的广东省清远市清新县地底下村养殖场、中山市广成围养殖场2个场及草鱼散养的广州市西朗养殖池塘及草鱼寄生虫病进行了初步的调查，旨在摸清草鱼寄生虫种类和数量与池塘中水质因子、自由生活的纤毛类原生动物数量之间的关系。同时在调查的过程中，对指环虫在鳃片上的寄生特点及动态变化进行了研究;在不同硬度碱度水质中对多子小瓜虫孢囊孵化及幼虫活力的影响研究。在实验室条件下，感染草鱼，进行组织病理观察;对在调查中收集到的一株多子小瓜虫对热应激的分子机理进行了初步研究。主要结果和结论如下： 1.调查发现，草鱼的寄生虫与季节和温度密切相关，在温度较高（15℃～32℃）的5～11月，草鱼的寄生虫主要为车轮虫、指环虫;在气温变化的交替时节，车轮虫更容易暴发。分析数据显示，集约化养殖草鱼纤毛类寄生虫平均感染率、丰盛度分别为71%和‘++（5～10）’;散养的平均感染率、丰盛度分别为20%和‘+（1～5）’。集约化养殖草鱼纤毛类寄生虫感染率、丰盛度比散养化的高。对广州西朗养殖草鱼塘的调查发现，散养的草鱼鳃上指环虫感染率高，都在0.93以上，在温度较高的7、8月，鳃上指环虫的丰盛度分别达到33.5和31.5。指环虫种群方差和平均数之比DI，负二项参数K值，扩散性指数I§大于1，表明指环虫种群在宿主种群呈聚集分布，在6～11月调查期间，发现草鱼鳃上指环虫右侧第1对鳃片丰盛度小于左侧的外，其余的都大于左侧鳃片上的丰盛度。 2.调查采得一株在28～30℃水体中依然能感染草鱼的多子小瓜虫，对多子小瓜虫的HSP70（热激蛋白70）基因进行了克隆以及在不同温度下多子小瓜虫不同阶段的表达分析，发现其ORF为1995bp，编码664aa。多子小瓜虫HSP70（Im HSP70）的基因结构分析发现，Im HSP70的二级结构主要为以α-螺旋和无规卷曲为主，空间构型包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域。与其它物种HSP70蛋白序列进行同源性比较发现，Im HSP70与螅状独缩虫（Carchesium polypinum）HSP70的同源性最高为78.08%。系统发育分析显示，Im HSP70与分类地位同为纤毛门的螅状独缩虫、嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)、变藓棘毛虫(Sterkiella histriomuscorum)的HSP70聚在一个分支。采用荧光定量RT-PCR检测了多子小瓜虫在三种不同温度中（20℃、25℃和30℃），Im HSP70基因在三个不同发育阶段（幼虫、滋养体和包囊）的表达量情况。结果显示，幼虫在3种温度下表达量均最低;在20℃和25℃时，滋养体中的表达量高于幼虫和包囊;而在30℃时，包囊中的表达量高于滋养体和幼虫;幼虫和包囊在30℃时的表达量均高于25℃。 3.在适温20℃条件下，通过硬度、碱度对多子小瓜虫孵化及活力的影响研究发现，在水体硬度和碱度都为0mmol/L时，多子小瓜虫包囊壁的厚度最大为70.5μm，当硬度和碱度增大到4mmol/L时，包囊壁厚度变薄为21.4μm。多子小瓜虫孵化时间在硬度、碱度为0.5mmol/L和0.1mmol/L显著的低于其他实验组;幼虫保持活力时长，硬度、碱度分别为0mmol/L组显著的低于其他组;其次是硬度、碱度分别为4mmol/L和0.1mmol/L组。 本论文结果表明，草鱼寄生虫的发生与生态因子中的水温、碱度、硬度等有着一定的相关性，在30℃，多子小瓜虫HSP70在滋养体中表达最低，但是在包囊中表达最高，进一步的说明了包囊是多子小瓜虫度过不利环境的主要方式。水体中的碱度、硬度对多子小瓜虫壁厚、孵化出幼虫的时间、幼虫保持活力的时长及孵化率都有着一定的影响，对于水体中的Mg2+, Ca2+浓度与水温的交叉作用对多子小瓜虫的影响需要深入研究。草鱼纤毛类寄生虫感染率、丰盛度与水体中纤毛类原生动物的关系也待进一步研究。
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