中药“十八反”对秀丽隐杆线虫的毒性作用和对CYP基因转录水平的影响

作     者：任艳 

作者单位：吉林农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王琦;马吉胜

授予年度：2013年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：十八反 甘草 秀丽线虫 毒性作用 CYP基因 

摘      要：研究目的：中药“十八反是传统中药配伍禁忌的重要原则之一,对指导中药临床应用至关重要。我们采用秀丽隐杆线虫体系评价了甘草与甘遂、芫花1：1配伍用药的安全性及其对CYP基因转录水平的影响。 研究方法：将甘草分别与甘遂和芫花按1：1比例配伍,经蒸馏水提取、浓缩后冷冻干燥后,在96孔板上测定不同药物浓度和作用时间对线虫存活率和生殖能力的影响,并采用RT-PCR方法测定药物作用对CYP基因转录水平的影响。 研究结果：各100g甘草、甘遂和芫花单味药材以及50g甘草和50g甘遂、50g甘草和50g芫花1：1比例配伍,经处理后分别得到25-37g冻干粉,单位冻干粉所含生药量在2.75-3.96g/g之间。 N2野生型秀丽隐杆线虫可以在96孔板的液体环境中正常生长和发育,与NGM固体平板培养相似。 毒性评价结果表明,甘草对线虫生长和活动无影响。甘遂组线虫出现特征性的“O形或“8字形运动,且活动度降低。芫花组线虫出现特征性的“ε形运动,且活动度降低。甘草甘遂配伍组和甘草芫花配伍组分别较甘遂组和芫花组的毒性作用增加。研究测定甘草作用24h和48h的LCso值均10000μg/mL;甘遂作用24h和48h的LC50值分别为111.9和28.1μg/mL;甘草甘遂配伍作用24h和48h的LCso值分别为14.2和3.7μg/mL;芫花作用24h和48h的LC50值分别为286.5和71.4μg/mL;甘草芫花配伍作用24h和48h的LC5o值分别为29.6和11.0μg/mL。对线虫生殖能力的实验结果表明,甘草能促进线虫排卵,而甘遂、芫花及其与甘草配伍均能延迟线虫排卵时间,并减少排卵量。 甘草、甘遂、芫花单味使用和配伍使用均能影响线虫CYP14A3、CYP33C2和CYP13A7基因的转录水平。甘草对线虫CYP14A3、CYP33C2和CYP13A7基因的转录有诱导作用;甘遂对CYP33C2和CYP13A7等基因的表达有诱导作用;两者1：1配伍时对CYP14A3有明显的协同诱导作用。芫花对线虫CYP14A3、 CYP33C2和CYP13A7有诱导作用;两者1：1配伍时对CYP14A3有抑制作用趋势,对CYP33C2有轻微的诱导作用,对CYP13A7有诱导作用。 研究结论：甘草与甘遂、芫花配伍使用增加药物的毒性作用,并影响线虫CYP14A3、CYP33C2和CYP13A7的转录水平。线虫可以用于测试中药的毒性作用及机制研究,为药物相互作用研究提供了一个新模型。