抗-EMMPRIN单克隆抗体在抑制人舌鳞癌侵袭作用中的实验研究

作     者：张娟 

作者单位：昆明医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李永生

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：EMMPRIN CD147 MMPS 舌鳞癌 侵袭作用 

摘      要：目的：本研究通过抗-EMMPRIN单克隆抗体、基质金属蛋白酶抑制剂多西环素及抗-EMMPRIN单克隆抗体与多西环素联合应用分别观察对人舌鳞癌Tca8113细胞及裸鼠移植瘤的抑制作用,从而探索阻断肿瘤侵袭的机制,为治疗口腔鳞癌寻找新途径。 方法： ***法(四甲基偶氮唑蓝法)：通过加入药物抗-EMMPRIN单克隆抗体、多西环素、抗-EMMPRIN单克隆抗体与多西环素联合用药,观察三种药物对舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制作用;2.构建裸鼠Yca8113细胞皮下移植瘤动物模型：通过于裸鼠右腋皮下注射1×106个混匀的Tca8113细胞,观察成瘤情况。成瘤两周后随机分为4组,每组8只,分别为对照组(生理盐水,0.1ml/d)、抗-EMMPRIN单克隆抗体组(10mg/kg/d)、多西环素组(20mg/ml/3d)、抗-EMMPRIN单克隆抗体(10mg/kg/d)+多西环素(20mg/ml/3d)。开始给药后每隔3天称重裸鼠,游标卡尺测量肿瘤结节的长短直径。4周后处死,连同包膜完整剥离肿瘤组织,称重。根据肿瘤体积计算抑瘤率 3.免疫组织化学法(SP法)检测蛋白表达：采用SP法检测各组裸鼠肿瘤组织内CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表达。CD147阳性信号定位于细胞膜和细胞浆,MMP-2阳性信号定位于细胞膜和细胞浆,MMP-9阳性信号定位于细胞质和细胞膜,成棕黄色颗粒。每张切片随机选取4个高倍视野,计数癌细胞中阳性细胞数,分别按以下比例分级：0级为无明显阳性反应细胞;1级为阳性细胞50%、强染色。0-1级判为阴性表达;2-3级判为阳性表达。 结果： 1.细胞增殖抑制实验结果：抗-EMMPRIN单克隆抗体及多西环素联合用药24h、48h、72h对Tca8113细胞的增殖抑制作用强于单独使用抗-EMMPRIN单克隆抗体和多西环素;单独使用抗-EMMPRIN单克隆抗体对细胞的增殖抑制作用强于单独使用多西环素,P0.05)。抗-EMMPRIN单克隆抗体组、多西环素组及联合用药组抑瘤率分别为37.58%、34.28%及40.35%。 ***147及MMP-2, MMP-9蛋白表达：对照组CD147蛋白阳性表达率为100%.MMP-2蛋白阳性表达率为100%,MMP-9蛋白阳性表达率为100%。抗-EMMPRIN单克隆抗体组CD147蛋白阳性表达率为25%, MMP-2蛋白阳性表达率为12.5%,MMP-9蛋白阳性表达率为12.5%。多西环素组CD147蛋白阳性表达率为50%,MMP-2蛋白阳性表达率为50%,MMP-9蛋白阳性表达率为50%。联合用药组CD147蛋白阳性表达率为12.5%,MMP-2蛋白阳性表达率为12.5%,MMP-9蛋白阳性表达率为12.5%。 结论： 1.抗-EMMPRIN单克隆抗体及多西环素均能够抑制Tca8113细胞增殖及裸鼠舌鳞癌移植瘤的生长,二者联合抑制效果更强。 2.抗-EMMPRIN单克隆抗体及多西环素均能够降低裸鼠舌鳞癌移植瘤内CD147及MMP-2, MMP-9蛋白表达,二者联合用药后CD147及MMP-2, MMP-9蛋白的表达更弱。CD147蛋白表达下调,则MMP-2, MMP-9蛋白表达亦下调。