当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡的实验研究

作     者：曾炜炜 

作者单位：武汉大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邹典定

授予年度：2005年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：当归多糖 K562白血病细胞株 细胞增殖 细胞凋亡 

摘      要：目的:当归多糖是从当归中提取出来的有效成分,体外实验表明,它有较强的抗 癌活性。本研究旨在观察当归多糖对K562白血病细胞株增殖抑制作用,并从细胞凋 亡角度这一新视野入手探讨其作用机制。 方法:1、观察当归多糖对K562细胞的增殖作用,采用250—1000ug/ml当归多 糖处理K562细胞,应用台盼蓝拒染法观察当归多糖对细胞增殖的影响;2、从细胞 凋亡的角度对作用机制进行探讨,采用瑞氏染色和电子显微镜观察用药组细胞形态学 改变。不同浓度当归多糖分别处理K562细胞,倒置显微镜、电镜下观察;3、为进 一步验证DNA断裂的产生,我们采用小量凋亡DNA抽提试剂盒提取细胞内DNA行 琼脂糖凝胶电泳;4、流式细胞仪观察药物对细胞凋亡的诱导作用。 结果:结果表明:1、当归多糖对K562细胞生长呈显著的抑制作用,且该作用 表现出明显的量效和时效依赖关系;2、倒置显微镜下可见四种细胞形态:核染色质 正常的死、活细胞,核染色质固缩或碎裂的早期和晚期凋亡细胞。电子显微镜下可观 察到凋亡的典型形态学变化:细胞体积缩小,胞膜皱缩,表面绒毛消失,核固缩或碎 裂,沿核膜边集,并有凋亡小体形成;3、琼脂糖凝胶电泳结果未见凋亡特有的DNA 条带;4、在采用流式细胞仪对细胞周期和凋亡率进行的定量检测中,我们发现了亚 G1峰的出现,标志着凋亡现象的发生。1000ug/ml当归多糖对K562细胞凋亡率为最 高,可达到20.8%。细胞周期分析表明,当归多糖可将细胞阻滞于S期。 结论:(1)当归多糖在体外能明显抑制K562白血病细胞的增殖;(2)其作用是 通过诱导肿瘤细胞凋亡而实现的