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斜纹夜蛾核型多角体病毒对宿主种群内遗传多态性的适应性研究

斜纹夜蛾核型多角体病毒对宿主种群内遗传多态性的适应性研究

作     者:任彬元 

作者单位:南京农业大学 

学位级别:硕士

导师姓名:郭慧芳

授予年度:2014年

学科分类:09[农学] 0904[农学-植物保护] 

主      题:斜纹夜蛾 核型多角体病毒 AFLP 种群内遗传多态性 致病力 

摘      要:寄主遗传多样性对于其抵御寄生物感染至关重要,此已在脊椎动物和无脊椎动物中得到一些实验证实。核型多角体病毒(NPV)作为昆虫体内寄生物,常在寄主自然种群中侵染流行,是一类重要的害虫生物防治资源。NPV受宿主遗传多样性的影响如何?这方面的研究报道较少。斜纹夜蛾Spodoptera litura是农业上的重大害虫,其食量大,食性杂,且分布广泛,常暴发成灾。斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltNPV)是斜纹夜蛾自然种群的重要调节因子,已被开发为生物杀虫剂。斜纹夜蛾自然种群内遗传多态性如何?其自然感染的NPV又是如何适应宿主遗传多态性?这方面的研究不仅有利于阐明寄主和寄生物协同进化策略,同时也有利于更好地利用NPV进行有效的害虫生物防治。为此,本文研究SpltNPV安徽和县株的遗传多态性,并同时研究斜纹夜蛾和县种群内的遗传多态性,进而研究病毒对宿主遗传多态性的适应性。研究结果如下:1在中国安徽和县采集到自然感染病毒的斜纹夜蛾病虫,从中分离出SpltNPV 15个活体克隆株系。对15个活体克隆株系基因组DNA分析表明,其EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制性酶切图谱未有明显差异。进一步扩增15个活体克隆株系的细胞凋亡抑制(IAP)基因、p49基因、晚期表达因子lef-4, lef-5, lef-8, lef-11基因和DNA解旋酶基因等基因,发现其相同基因序列无差异;基因序列比对及系统发育分析表明,SpltNPV和县株与已报道的SpltNPV其它株系的同源性很高,表明SpltNPV IAP宿主域相关等基因较为保守。研究尚未发现SpltNPV和县株内有丰富的遗传多态性。2从采集于安徽和县甘蓝上的斜纹夜蛾中随机建立了7个单雌系,并在室内连续饲养。对各单雌系进行扩增片段长度多态性(AFLP)分析,先利用4对引物进行初步筛选,选取扩增结果差异大的3个单雌系,进一步利用36对引物对45头斜纹夜蛾个体(每单雌系15头)分别进行扩增。共获得1024个扩增片段,其中多态性条带为880条,平均每对引物的扩增条带为28.44条。多态性比率(PPB)平均为86, Shannon’s多样性指数平均为0.4663,有效等位基因介于1.3816~1.7344之间。随后用PopGen 32软件分析,发现单雌系间的分化系数(Gst)为0.3203。对3个单雌系的斜纹夜蛾进行遗传距离的测定,结果发现斜纹夜蛾A、B和C3个单雌系间有一定的遗传分化,其中B与A或C的遗传分化更为明显,遗传相似系数均小于0.78。以上结果表明,斜纹夜蛾和县种群内有一定的遗传多态性。3在获得均来源于中国安徽和县的有遗传差异斜纹夜蛾单雌系以及S pltNPV的基础上,进一步研究了6个SpltNPV样品对有遗传差异的3个斜纹夜蛾单雌系致病力差异,发现病毒对不同单雌系的致病力存在显著差异,其中对单雌系B的致病力最低,A次之,对C的致病力最高,且各差异在6个病毒活体克隆株系间均一致。较致病力差异,病毒在不同单雌系间的杀虫速度差异要小,6个病毒活体克隆株系中有3个发现有杀虫速度的差异,主要表现为对单雌系B的杀虫速度显著低于另两个。研究结果表明NPV可以不同感染水平来适应遗传多态性丰富的宿主种群。

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