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多西环素对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞(SKOV3)及其干细胞样细胞(SKOV3/CSC)的体外影响

作     者:刘万川 

作者单位:河北医科大学 

学位级别:硕士

导师姓名:张辉

授予年度:2016年

学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题:卵巢癌 卵巢癌干细胞 多西环素 线粒体膜电位 CD133 ALDH 

摘      要:目的:探讨多西环素(Doxycycline,DC)对人卵巢癌细胞(SKOV3)及其干细胞样细胞(SKOV3/CSC)的体外影响,并初步探索其抑瘤机制。方法:1体外培养亲本细胞SKOV3(人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞)及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP并连续传代,于倒置显微镜下观察细胞形态。采用无血清培养法培养SKOV3/CSC细胞,并以流式细胞仪检SKOV3及SKOV3/CSC细胞CD133表达率,用Aldefluor法检测ALDH酶活性。用MTS法检测不同浓度(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml)多西环素对SKOV3、SKOV3/CDDP及SKOV3/CSC细胞的抑制率,及低浓度(5μg/ml)多西环素对SKOV3/CDDP、SKOV3/CSC细胞顺铂敏感性的影响。2以流式细胞仪检测不同浓度(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml)多西环素处理后的SKOV3及SKOV3/CSC细胞的凋亡率,以及各组细胞线粒体膜电位的变化。并用电子显微镜观察20μg/ml多西环素处理后的SKOV3、SKOV3/CSC细胞超微结构改变。3以Western-Blotting检测不同浓度(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml)多西环素处理后SKOV3/CSC细胞中Caspase-3、Caspase-9以及胞质中细胞色素C的表达情况。4以Transwell迁移、侵袭实验观察不同浓度多西环素处理后的SKOV3(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)及SKOV3/CSC(0μg/ml、5μg/ml)细胞的迁移及侵袭能力变化。结果:1流式细胞检测结果显示SKOV3、第一、三、五、七、九代SKOV3/CSC细胞的CD133表达率分别为(0.99±0.02)%、(1.11±0.06)%、(1.34±0.05)%(1.26±0.14)%、(1.32±0.07)%、(1.93±0.14)%随着传代次数增加CD133表达率无明显增高,ALDH阳性率分别为(0.35±0.01)%、(0.79±0.02)%、(33.30±0.16)%(67.65±0.44)%、(90.24±0.16)%、(91.66±0.64)%,随着传代次数增加ALDH阳性率显著增高。2 MTS结果显示多西环素可抑制SKOV3、SKOV3/CDDP及SKOV3/CSC细胞体外增殖,并可增加SKOV3/CDDP、SKOV3/CSC细胞的顺铂敏感性。2.1多西环素抑制SKOV3细胞体外增殖。5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml多西环素作用24h后SKOV3细胞抑制率分别为(-4.39±2.99)%、(-4.32±3.35)%、(11.76±1.73)%、(36.24±2.01)%(P=0.2320.05、P=0.2790.05、P=0.0010.05、P=0.44990.05、P0.05、P=0.00040.05、P0.05、P=0.00020.05、P0.0001、P0.0001),48h抑制率分别为(9.68±2.95)%、(23.84±2.87)%、(49.20±2.98)%、(70.58±1.22)%(P=0.03730.05、P0.0001、P0.0001、P0.0001),具有剂量、时间依赖性。2.4 SKOV3/CDDP、SKOV3/CSC细胞比SKOV3

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