AMHR2在围种植期大鼠子宫内膜表达模式的探讨

作     者：韩国庆 

作者单位：皖南医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：梁元姣

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：抗苗勒管激素(AMH) 抗苗勒管激素2型受体(AMHR2) 动情周期 子宫内膜 子宫内膜容受性 种植窗 

摘      要：目的:本究旨在探索AMHR2在正常性成熟雌性SD大鼠中各动情周期以及围种植期子宫内膜中的表达情况。方法:取8周龄的清洁级SD雌性大鼠100只,将100只分为两大组,第一组大鼠,按01--40顺序编号,适应性饲养一周后,采用阴道涂片法鉴定大鼠动情周期。首先选取存在正常规律动情周期的雌性大鼠,取材日阴道涂片,根据涂片结果将大鼠分别纳入动情前期(P)、动情期(E)、动情后期(M)和动情间期(DI)4组,眼球取血后,断颈处死大鼠,取子宫,用于冻存和制作石蜡切片,研究AMHR2在各动情周期大鼠子宫中的分布及变化规律,同时观察大鼠子宫形态学和组织学改变;放射免疫法测定大鼠血清性激素水平。其次,第二组大鼠,按41-100顺序编号,适应性饲养一周后,同样采用阴道涂片法,同样选取存在正常规律动情周期的雌性大鼠,于P、E期与正常性成熟的SD雄性大鼠交配,次日镜检发现精子或肉眼发现阴栓,记孕D1,讲孕鼠分别于孕D2-D8天处死,分别纳入D2-D8这7个组,眼球取血后,断颈处死大鼠,同样取其子宫用于冻存和制作石蜡切片,研究AMHR2在围种植期大鼠子宫内膜中的分布规律。同时观察子宫形态学和组织学改变;放射免疫法测定大鼠血清性激素水平。结果:各动情周期中:大鼠血清性激素测定结果显示SD大鼠体内激素随着动情周期的变化而变化。免疫组化显示,AMHR2蛋白在大鼠各动情周期子宫内膜中主要定位于间质细胞。qPCR检测发现AMHR2基因从P期到DI期有着相对表达量的变化,其中在E期表达最低,DI期表达最高,且E期与DI期相比,AMHR2基因相对表达量差异具有显著统计学意义(P=0.04,P0.05)。AMH与AMHR2的基因在不同动情周期的子宫内膜中表达趋势相同。Westernblotting结果进一步证明,AMHR2和AMH蛋白表达趋势与基因表达趋势一致。AMHR2蛋白在P期到E期呈下降趋势,在E期表达最低,M期逐渐升高,DI期表达最多。其中,与P期相比,M期中AMHR2表达升高,差异具有统计学意义(P期vs M期,P=0.004,P0.01),DI期中AMHR2表达也升高,差异具有高度统计学意义(P期vs DI期,P=0.000,P0.001)。与E期相比,M期和DI期AMHR2蛋白表达升高,差异均具有高度显著统计学意义(E期vs M期,P=0.003,P0.01;E期vs DI期,P=0.000,P0.001)。与DI期相比,M期AMHR2蛋白表达降低,差异具有显著统计学意义(M期vs DI期,P=0.003,P0.01)。AMH蛋白表达趋势与AMHR2蛋白表达趋势相同,均在E期表达最低。与P期相比,M期中AMH蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P期vs M期,P=0.006,P0.01),DI期中AMH表达也升高,差异具有高度统计学意义(P期vs DI期,P=0.001,P0.01)。与E期相比,M期和DI期AMH蛋白表达均升高,差异均具有高度显著统计学意义(E期vs M期,P=0.002,P0.01;E期vs DI期,P=0.000,P0.001)。在大鼠的围种植期中:免疫组化显示,AMHR2在孕鼠D2-D8子宫内膜中同样定位于间质细胞。AMHR2蛋白免疫阳性产物在D2-D8子宫内膜的表达变化规律如下:D2-D5呈下降的趋势,D5最浅,后D6-D8逐渐变深。提示AMHR2与可能与种植窗的出现相关,即可能与子宫内膜的容受性相关。qPCR检测发现围种植期D2-D8的AMHR2基因呈先下降后上升的趋势,D2-D4呈下降趋势,D5-D8呈上升趋势,且与D8组相比,D3组、D4组、D5组、D6组AMHR2基因表达均具有统计学差异(D3组vs D8组,P=0.015,P0.05;D4组vs D8组,P=0.015,P0.05;D5组vs D8组,P=0.014,P0.05;D6组vs D8组,P=0.016,P0.05)。AMH基因检测结果同样也呈先下降后上升的趋势,D2-D4呈下降趋势,D5-D8呈上升趋势,且与D8组相比,D3组、D4组、D5、D7组AMH基因表达均具有统计学差异(D3组vs D8组,P=0.014,P0.05;D4组vs D8组,P=0.014,P0.05;D5组vs D8组,P=0.014,P0.05;D7组vs D8组,P=0.018,P0.05)。Western-blotting结果进一步证明,AMHR2和AMH蛋白表达趋势与基因表达趋势一致。AMHR2蛋白在D2-D8组中呈先下降后上升的趋势。其中,与D2组相比,D4组AMHR2表达下降;D8组AMHR2蛋白表达升高,均有统计学差异(D2组vs D4组,P=0.006,P0.01;D2组vs D8组,P=0.002,P0.01)。与D3组相比,D6、