太子参细胞悬浮培养及其皂苷的提取与分析

作     者：林龙云 

作者单位：福建农林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：潘大仁

授予年度：2006年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：太子参 细胞培养 皂苷 HPLC 

摘      要：本研究以太子参的幼叶为外植体，诱导培养获得太子参愈伤组织，从而建立太子参细胞悬浮系并从中提取、分离出太子参皂苷;研究不同水平或组合的激素、氮源、磷源、碳源、肌醇、细胞接种量等因素对太子参细胞生长及其皂苷合成的影响，从而建立太子参细胞生长及其皂苷合成的动态曲线，通过太子参细胞悬浮获得最高太子参皂苷产量。研究结果如下： 1．用MS／NB+BA0.2mg·L+2，4-D1.0mg·L+KT1.0mg·L液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞。 2．由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同，但纯度较好。细胞悬浮培养约30d时，培养1g干重细胞的培养液可提取总皂苷量为2.13-2.92mg，略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量(3.6-4.3mg)，与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近。 3．太子参细胞悬浮培养培养条件优化结果表明：以5.0mmol·LKHPO+0.5mmol·L(NH)SO+2.06mmol·LCaCl+200mg·L肌醇+40g·L蔗糖改良的NB为基本培养基，激素配方为2，4-D1.0mg·L+NAA3.0mg·L+KT0.5mg·L，配合每20mL培养液接种0.03g(DW)左右的细胞液，为最适培养条件。 4．以最适培养条件进行培养，建立太子参细胞生长与皂苷合成的动态曲线结果表明：在第24d太子参细胞生长到达曲线顶峰，即可获最大的太子参细胞生物量，0.3578g(DW)·20mL。此后，太子参细胞生长量开始下降，而太子参皂苷含量开始迅速增加，在第45d达到皂苷产量的最大值329.7147mg·20mL。