因子胁迫对栉孔扇贝（Chlamys farreri）血细胞免疫响应的影响

作     者：张冬冬 

作者单位：中国海洋大学 

学位级别：硕士

导师姓名：邢婧

授予年度：2013年

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

主      题：栉孔扇贝Chlamys farreri 血细胞数量 免疫相关基因 因子胁迫 

摘      要：本论文研究了水温突变、不同温度干露、饥饿及繁殖后，栉孔扇贝全血细胞数量、颗粒血细胞数量及比例的变化;以及不同温度下两种浓度鳗弧菌感染后，栉孔扇贝血细胞数量、颗粒血细胞数量及血细胞6种免疫相关基因，脂多糖β-1,3葡聚糖结合蛋白(LGBP)、C-型凝集素(Lec-2)、Toll样受体(TLR)、溶菌酶(LYZ)、超氧化物歧化酶(SOD)和酚氧化酶(PO)表达量的变化。 1．四种因子变化对栉孔扇贝血细胞数量变化 血细胞及其亚群的数量是栉孔扇贝(Chlamys farreri)重要的免疫指标之一。本章研究了栉孔扇贝在17℃下，分别经水温突变(11℃、23℃、28℃)，不同温度(5℃、11℃、17℃、23℃)干露、饥饿和雌雄扇贝繁殖刺激，应用以抗栉孔扇贝全血细胞单抗、颗粒血细胞单抗分别为第一抗体的间接酶联免疫吸附实验和流式细胞术测定全血细胞数量、颗粒血细胞数量及比例的变化。结果表明：水温突变后全血细胞数量均先增加然后逐渐下降，水温变化幅度大全血细胞数量变化较大，颗粒血细胞数量及比例在11℃组始终显著高于对照组，23℃和28℃组表现出先下降后上升的趋势。不同温度干露后全血细胞和颗粒血细胞数量均显著降低，海水恢复后5℃组较11℃、17℃组更接近对照组，23℃组干露12h扇贝全部死亡。饥饿处理组、产卵或者排精后过夜全血细胞数量、颗粒血细胞数量及比例均显著降低。结论认为：全血细胞及颗粒血细胞数量对温度变化的反应敏感;较低水温有利于细胞数量的提升，较高水温下细胞数量下降显著;低温干露后细胞数量恢复较好，高温干露扇贝存活率差。饥饿和繁殖压力会导致全血细胞数量、颗粒血细胞数量及比例及减少。 2.弧菌感染后栉孔扇贝血细胞数量及免疫相关基因表达的变化 本章研究了11℃、17℃、23℃、28℃下，栉孔扇贝(Chlamys farreri)分别注射10、10CFU/ml的鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和PBS后，应用以抗栉孔扇贝全血细胞单抗和颗粒血细胞单抗分别为第一抗体的间接酶联免疫吸附实验(ELISA)测定全血细胞和颗粒血细胞数量的变化，同时应用实时定量荧光PCR技术检测免疫相关基因(LGBP、Lec-2、TLR、SOD、LYZ和PO)表达量的变化。结果表明：感染10CFU/ml鳗弧菌全血细胞及颗粒血细胞数量无显著变化;10CFU/ml组全血细胞数量除28℃均显著增加后下降，且23℃增加更明显;28℃36h下降至最低值然后增加;10CFU/ml组颗粒血细胞数量均降低，温度越高降低幅度越大;17℃、23℃基因的表达水平较高，28℃下基因的表达量最终几乎均显著的低于对照组。综上研究认为鳗弧菌感染栉孔扇贝，血细胞的数量及免疫相关基因表达均具有显著的温度相关性，较高温度下变化更加显著;血细胞数量及免疫相关基因表达量变化幅度10CFU/ml组均高于10CFU/ml组。