野生桔梗资源调查及遗传多样性的分析

作     者：于亚彬 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：严一字

授予年度：2010年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：野生桔梗 遗传多样性 SRAP分析 

摘      要：近年来,桔梗的出口量逐年增加,利益的驱动加速农民对长白山区野生桔梗的掠夺式的采挖,在人类未充分利用野生资源之前,野生桔梗资源正面临严重的破坏甚至面临灭绝的威胁。为此,本研究在调查长白山区野生桔梗资源现状并收集种质资源的基础上,分析野生桔梗资源的遗传多样性并与栽培桔梗资源相比较,旨在为建立野生桔梗种植资源库及长白山区野生桔梗资源的保护和开发利用提供参考依据。 1、对长白山区24个点的野生桔梗的生境和生长情况的调查结果表明：现存的野生桔梗大多数生长在生境比较恶劣的地方或非常偏远、人迹稀少的地方,因为其生境比较恶劣,根太小而没有利用价值或地方太偏远、不易采挖而幸存。 2、把从长白山区24个点采集的野生桔梗种子种植在农学院试验田,测定1年生野生桔梗的株高等8个主要农艺性状的变异范围,并与24份栽培桔梗进行比较的结果表明：种植在试验用的野生桔梗后代生长旺盛,株高等8个主要农艺性状的变异范围与栽培桔梗基本相似,说明野生桔梗和栽培桔梗之间还没有形成明显的差异,有的野生桔梗资源可以在桔梗生产中直接利用。 3、对供试的不同来源的野生桔梗和栽培桔梗各8份种质资源比较分析了株高等8个主要农艺性状的遗传多样性的结果表明：所比较分析的8个农艺性状在野生和栽培桔梗内都有遗传多样性,并且方差分析结果多数性状在野生桔梗和栽培桔梗内部都有显著或极显著差异,但野生和栽培桔梗之间除了茎粗外都不存在显著差异,并且在次数分布图上互相交叉分布,说明所比较分析的8个农艺性状的遗传多样性在野生桔梗和栽培桔梗之间有一定的相似性。 4、用比色法测定了种植在农学院试验田的一年生野生桔梗和栽培桔梗各8份种质资源的根中总皂苷含量的结果表明：野生桔梗和栽培桔梗内的各种质资源间总皂苷含量都有一定的差异,栽培桔梗平均总皂苷含量为2.664%,野生桔梗平均总皂苷含量为2.517%,但野生桔梗和栽培桔梗间无明显差异。 5、以桔梗为实验材料,建立一个适合桔梗的比较稳定的SRAP反应体系的结果表明：桔梗SRAP扩增反应的最佳体系为模板DNA 20ng,引物0.8μmol/L, dNTP 150μmol/L, MgCl2 2.0 mmol/L, Taq DNA聚合酶1 unit,10×Buffer 2.0μL;反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1min,50℃退火1 min,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸5 min,4℃保存。按此优化的SRAP反应条件进行实验,重现性良好。 6、采用SRAP分子标记技术,对8份野生桔梗和8份栽培桔梗种质资源进行遗传物质多态性的研究的结果表明：用12对随机引物组合共扩增出109条谱带,平均每对引物组合扩增出9.1条谱带,并扩增出80个多态性谱带,平均每对引物组合扩增出6.7条多态性谱带,显示出了较高的多态率(73.4%);得到的SRAP数据的遗传相似系数范围为0.56-0.88,并以遗传相似系数0.56为标准,将16份桔梗种质资源分为野生桔梗和栽培桔梗2大类群。