SE大鼠海马NKCC1，GABAARα1表达改变及BDNF对其的影响

作     者：刘昕 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：肖波

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：癫痫持续状态 NKCC1 GABAARα1 BDNF 

摘      要：目的：观察大鼠癫痫持续状态(SE)后3天内海马组织内NKCC1及GABAARα1表达的改变,及使用BDNF中和性抗体血清(anti-BDNF)干预后其表达的变化,探讨NKCC1在SE中可能机制及其与GABAARα1的关系,以及BDNF在SE发生过程中对NKCC1和GABAARα1表达的影响,研究其在癫痫发病机制中的作用,从而寻找癫痫新的治疗靶点。 方法：健康成年雄性SD大鼠135只,随机分为生理盐水对照组(15只),SE组(60只)和干预组(60只)。用氯化锂-匹罗卡品(LiC1-PILO)腹腔注射制作大鼠SE模型(SE组),在LiC1-PILO造模前3～4小时立体定向侧脑室注射anti-BDNF制作干预组模型(干预组),两组均选取SE后2h,6h,24h,3d为实验点。观察两组大鼠在SE诱发过程中行为学差异,RT-PCR检测各组大鼠海马NKCC1、GABAARα1 mRNA表达改变,Western-Blot检测NKCC1、GABAARα1蛋白的表达,利用免疫组化检测海马各区NKCC1、GABAARα1时空分布的特点。 结果： 1.动物实验结果：与SE组相比,干预组SE诱发成功率低(分别为90.7%和75.27%),SE诱发成功后生存状态好,死亡率低(分别为23.08%和14.29%)。与SE组相比,干预组诱发SE所需PILO平均用量(分别为22.78±6.69mg／kg和42.78±6.69mg／kg)、诱发SE所需的平均时间(分别为41.17±18.94min和89.72±11.28min)及10%水合氯醛总量平均值(分别为0.91±0.05ml／100g和0.76±0.06ml／100g)均有明显差异,具有统计学意义(p0.01)。 ***1表达改变：SE组NKCC1的mRNA及蛋白在SE后均高于对照组(p0.01),2h显著上调,6h达最高,24h后开始恢复,3d时仍高于正常。以上各时间点海马NKCC1蛋白表达亦均高于对照组(p0.01),在海马不同亚区,在SE后两小时开始,NKCC1在CA1及CA3区均显著增高。干预组NKCC1的mRNA及蛋白表达在2h显著增加,6h达最高,24h后开始明显恢复,3d时接近正常。干预组2h、6h、24h和3d蛋白含量与对照组相比差异显著,具有统计学意义(p0.01)。NKCC1蛋白在海马各区的时空分布趋势与SE组相似。干预组与SE组相比,SE后各时间点NKCC1的表达差异非常显著(p0.01)。 3. GABAARα1表达改变：SE组GABAARα1的mRNA及蛋白在SE后2h-6h表达显著下调(p0.01),24h继续下降至最低值(p0.01),至3d突然增高(p0.01)。GABAARα1在海马不同亚区表达SE后2h开始CA1区及CA3区的GABAARα1蛋白表达显著进行性下调。干预组GABAARα1的mRNA及蛋白表达在SE后2h达最低值,6h后上调,3d达最高值(p0.01),GABAARα1蛋白表达在海马的空间分布特点与SE组相似。对照SE组,干预组GABAARα1蛋白表达变化的幅度小,周期短,两组GABAARα1的表达在SE后各时间点的差异显著,均具有统计学意义(p0.01)。 结论： ***1蛋白表达在SE后的上调可能是SE后GABAAR介导的兴奋性作用产生的重要机制之一。 2. Anti-BDNF干预可通过抑制BDNF的表达,延缓癫痫发生并减弱癫痫发作的严重程度。