乌司他丁通过维护糖萼的完整性从而对LPS诱导的ARDS小鼠的保护作用及其机制的研究

作     者：王利朋 

作者单位：滨州医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：王晓芝;刘向勇

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：急性呼吸窘迫综合征(ARDS) 乌司他丁(UTI) 乙酰肝素酶(HPA) 硫酸乙酰肝素(HS) 溶酶体 

摘      要：[目的]急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种急性呼吸衰竭的综合征,毛细血管通透性增加是其主要的临床病理表现。糖萼位于毛细血管的表面,是决定毛细血管通透性的重要组成部分。硫酸乙酰肝素(HS)是糖萼的重要组成部分,乙酰肝素酶(HPA)在降解HS方面起到重要作用。我们的研究目的就是测定乌司他丁(UTI)对由脂多糖(LPS)引起的肺毛细血管通透性增加和肺的内皮糖萼功能紊乱。另外UTI可以降低乙酰肝素酶(50kDa)的表达和活性,同时我们也研究了溶酶体pH对乙酰肝素酶的影响因为当脂多糖进入到溶酶体中时,可以引起溶酶体中pH的降低,在溶酶体低pH的环境下HPA很容易从没有活性的(65kDa)状态转变为有活性的(50kDa)状态,UTI可以抑制溶酶体中pH的降低。基于以上研究成果,本实验旨在探讨LPS诱导的ARDS小鼠模型中,UTI对抑制HPA的活性和保护糖萼免受炎症损伤方面的作用,为ARDS的临床诊疗提供新的理论依据。[方法]体内实验:把成年健康的雄性C57BL/6小黑鼠24只随机分成3组:正常组(control 组)、模型组(LPS 组 20mg/kg)、治疗组(UTI+LPS 组,UTI:100,000 U/kgi.p),治疗组在注射脂多糖之前提前一个小时注射乌司他丁,在腹腔注射LPS六小时后取血和肺保存备用。检测小鼠肺湿干比值,肺组织HE染色及病理学评分,50kDa中的表达。体外实验:把人脐静脉内皮细胞分成三组,正常组、模型组(LPS组,1μg/mL)、治疗组(UTI+LPS组,UTI:1000U/mL),利用免疫荧光测定细胞用伊文斯兰染色法测量肺毛细血管的通透性,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定HPA的活性和降解产物HS的含量。用Western Blot技术检测HPA在65kDa和中HS的含量,利用western blot测定细胞中HPA的含量,测定细胞中pH的含量。[结果]与正常组相比,模型组小鼠肺的湿干比明显上升,经过UTI给药后,小鼠肺的湿干比明显下降。同时,乌司他丁可以缓解ARDS对机体造成的损伤,其还可以通过抑制溶酶体膜的稳定性,来较少硫酸乙酰肝素酶的释放以及降低硫酸乙酰肝素酶的活性,从而抑制内皮糖萼主要成分硫酸乙酰肝素的降解,最终达到保护内皮糖萼完整性的目的,保护了肺毛细血管的完整性,进而缓解了 ARDS对机体造成的损伤。[结论]乌司他丁可以抑制乙酰肝素酶的活性,并且可以缓解肺内皮细胞糖萼的损伤,从而达到缓解由脂多糖诱导的ARDS小鼠对机体的损伤。