祛痰化瘀通脉颗粒促血管新生作用的探究

作     者：朱盛 

作者单位：北京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘建勋

授予年度：2012年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：大鼠急性心肌缺血模型 含药血清 鸡胚绒毛尿囊膜模型 人脐静脉内皮细胞 祛痰化瘀通脉颗粒 血管新生 

摘      要：缺血性心脏病是由于冠脉循环改变引起冠脉血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害。血管新生与中医药的结合为人类治疗缺血性心脏病提供了广阔的前景。开展中医药对缺血心肌血管新生促进作用的研究越来越得到广泛的重视。本课题旨在探究治疗痰滞血瘀证冠心病有效中药祛痰化瘀通脉颗粒对血管新生的作用。 一、祛痰化瘀通脉颗粒（QTHYTM）对急性心肌缺血大鼠血管新生的影响及机制研究 目的：探讨祛痰化瘀通脉颗粒（QTHYTM）对急性心肌缺血大鼠血管新生的影响及其机制。方法：对大鼠行左冠状动脉前降支结扎术致急性心肌梗死模型,采用伊文氏蓝-氯化三苯基四唑（TTC）双重染色法测定心肌缺血和心肌坏死面积,用免疫组化法测定缺血心肌微血管密度（MVD）,检测心梗边缘区VEGF及VEGFR-2的表达,观察QTHYTM对心肌缺血大鼠缺血心肌血管新生的影响。结果QTHYTM术后可明显缩小心肌梗塞及缺血面积,明显增加新生血管密度VEGF. VEGFR-2表达均有明显升高,与模型组比较,差异均有统计学意义（P0.05）。结论QTHYTM能促进心肌梗死后大鼠缺血心肌血管新生,增加微血管密度,其作用机制可能与与上调心肌局部VEGF、VEGF-2相关。 二、祛痰化瘀通脉颗粒（QTHYTM）对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响 1、QTHYTM含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响 目的：探讨祛痰化瘀通脉颗粒对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响。方法：将8日龄鸡胚制备鸡胚绒毛尿囊膜模型,随机分4个组,分别为空白血清对照组,药方大剂量组（成人20倍量）,药方中剂量组（成人10倍量）,药方小剂量组（成人5倍量）。培养3d后观察各组对CAM模型标本形态及血管新生数量的影响。结果：大剂量含药血清组粗大血管及细小分支迅速增多,血管网络清晰,呈叶脉样,放射性生长,血管新生数量明显高于空白血清对照组（P0.01）,中剂量及小剂量含药血清组与空白血清组比较有一定优势,但无统计学意义（0.05P0.1）。结论：祛痰化瘀通脉颗粒可明显促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。 2、丹酚酸A对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响 目的：探讨丹酚酸A对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响。方法：将8日龄鸡胚制备鸡胚绒毛尿囊膜模型,随机分5个组,分别为空白对照组,丹酚酸A大剂量组（52.6mg/L）,丹酚酸A中剂量组（17.5mg/L）,丹酚酸A小剂量组（5.8mg/L）及阳性药VEGF组。培养3d后观察各组对CAM模型标本形态及血管新生数量的影响。结果：丹酚酸A中剂量组（17.5mg/L）,二级血管生成数明显增加,差异有统计学意义（P0.01）;大剂量（52.61mg/L）及中剂量组的一级血管与空白组比较有一定的差异（0.01P0.05）;小剂量组（5.8mg/L）的一级血管、二级血管同空白组相应血管相比,差异无统计学意义（P0.05）。结论：丹酚酸A对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生有促进作用。 三、祛痰化瘀通脉颗粒对人脐静脉内皮细胞的促血管新生的作用 1、祛痰化瘀通脉颗粒对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响 目的：探究祛痰化瘀通脉颗粒对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响,探讨其促血管生成作用。方法：利用人脐静脉内皮细胞体外培养模型,通过制备不同浓度的祛痰化瘀通脉颗粒含药血清,采用MTT法检测细胞活性来反应其增殖能力,用细胞划痕实验观察给药后细胞迁移能力的影响。结果：与正常血清组比较,祛痰化瘀通脉颗粒大剂量、中剂量含药血清组对内皮细胞增殖能力明显增高（P0.01）,增殖率分别为49.78%、33.92%;对内皮细胞迁移能力也有提高,划痕区相对距离明显减少（P0.01）,细胞迁移率分别为11.360%、11.62%。结论：祛痰化瘀通脉颗粒对人脐静脉内皮细胞有促进增殖和迁移的作用,推断可能有促血管生成作用。 2、丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞迁移能力的影响 目的：探究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞迁移的影响,探讨其促血管生成作用。方法：利用人脐静脉内皮细胞体外培养模型,随机分为5组,空白对照组、丹酚酸A大剂量组（52.6mg/L）,丹酚酸A中剂量组（17.5mg/L）,丹酚酸A小剂量组（5.8mg/L）,空白对照组。用细胞划痕实验观察给药后细胞迁移能力的影响。结果：细胞划痕后16小时,52.6mg/L大剂量丹酚酸A组的划痕区相对距离明显减少,细胞迁移率为10.24%,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P0.05）。表明丹酚酸A能够促进HUVECs迁移。结论：丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞有促进迁移的作用,推断可能有促血管生成作用。 四、中药血清药理学方法学研究——祛痰化瘀通脉颗粒含药血清的药理强度与采血时间的关系研究 目的：探讨祛痰化瘀通脉颗粒含药血清的药理强度与采