鸡舍大肠杆菌的气溶胶发生及其传播模式

作     者：刘凤芝 

作者单位：山东农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：柴同杰

授予年度：2009年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：绿色荧光蛋白 大肠杆菌气溶胶 试验鸡舍 气溶胶传播模式 

摘      要：微生物是动物舍环境污染的主要因素,动物舍的生物污染可以引起一系列传染病的流行。近几年的研究表明,一些气载病原微生物能够通过空气传播很远的距离,造成传染病的流行,给畜禽和人类的健康带来很大的威胁。过去证明畜禽养殖环境微生物气溶胶的传播主要是通过舍内外环境中的细菌浓度的变化以及细菌耐药性及某些致病菌含量或者采用ERIC-PCR方法等方面来确认。然而,没能获得充分的证据证明畜禽舍微生物气溶胶向周围环境的传播。为了得到充分的证据证明微生物气溶胶向环境的传播,本实验以绿色荧光蛋白基因标记的大肠杆菌为指示菌,建立气溶胶传播模型。 绿色荧光蛋白作为一种新型的标记基因,被广泛用做原核细胞和真核细胞的报告基因。在受到紫外光或蓝光激发时可高效发射清晰可见的绿色荧光,具有稳定、灵敏度高且无需底物或辅助因子参与等优点。自绿色荧光蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)和秀丽隐杆线虫中成功表达后,绿色荧光蛋白及其他荧光蛋白己得到广泛的应用。 试验鸡摄入用绿色荧光蛋白(GFP)基因标记的E. coli JM109后,检测这种大肠杆菌在鸡体的排出及其形成气溶胶与传播过程。鸡饮完含E. coli JM109-pGFP饮水(5.0×1010 CFU/只)后,采用ANDERSEN-6级空气微生物样品收集器分别在不同时间采集鸡栏框内、栏框外2 m、5 m、10 m、20 m收集气载E. coliJM109-pGFP。通过每一个采样点JM109-pGFP浓度的变化来评估动物舍微生物气溶胶向舍外环境的传播情形。 结果显示,试验鸡饮完含E. coliJM109-pGFP的饮水, 0.5 h左右开始排出含E. coliJM109-pGFP的粪便,此时测量栏框内和栏框外2 m、5 m、10 m、20 m处JM109-pGFP气溶胶浓度达最高分别为1.531×103、8.080×102、3.360×102、2.250×102、6.600×10 CFU/m3;栏框内与栏框外不同距离间的JM109-pGFP浓度差异不显著(P0.05)。30 h时只能在栏框内收集到JM109-pGFP,为7 CFU/m3;36 h后栏框内也消失,而且随着时间各个不同距离的气载JM109-pGFP的浓度逐渐减少。结果表明,说明源于动物舍的微生物气溶胶能够通过舍内外气体交换传播到舍外,依气象条件传播到舍外不同的距离,造成周边环境的生物污染以及病原微生物的扩散。