苯并芘人工抗原的合成及其ELISA方法的建立

作     者：邵辉锋 

作者单位：江西师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈雪岚

授予年度：2014年

学科分类：081702[工学-化学工艺] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 09[农学] 0903[农学-农业资源与环境] 

主      题：苯并芘 多环芳烃 半抗原 人工抗原 间接竞争ELISA 

摘      要：苯并芘(Benzo(a)pyrene,Bap)是一种含有5个苯环的稠环芳烃,为多环芳烃的典型代表,是强致癌物之一,主要来源于煤和石油等有机物化合物的不完全燃烧或是热解。苯并芘分布非常广泛,在土壤、水、空气等环境中都有发现,其危害人类的主要途径是通过污染的空气、食品及饮用水。 本研究以苯并芘为起始反应物,通过碘代、Heck偶联两步化学反应合成苯并芘的羰基衍生物;再经肟化反应将羰基羧基化;最后采用活化酯法将羧基化半抗原与载体蛋白(牛血清蛋白和鸡卵清白蛋白)进行偶联,制备苯并芘的人工抗原。本试验采用红外光谱(IR)、核磁共振波谱(1H NMR和13C NMR、质谱(MS)对苯并芘衍生物进行了表征,并用紫外扫描的方法对人工抗原进行了鉴定。结果表明,成功羧化了苯并芘,并构建了人工抗原。以此人工抗原与苯并芘单克隆抗体建立了苯并芘间接竞争的酶联免疫吸附法。即通过方阵滴定法确定了包被抗原与抗体的适用浓度,对反应体系中甲醇浓度、pH、盐离子浓度等条件进行了优化,建立了相应的标准曲线,结果表明苯并芘的检测在5—50ng/mL范围内呈线性相关,线性方程是y=-28.105Ln(x)+123.66,R2为0.9937,IC50为13.74ng/mL。