聚集相关蛋白基因，转化生长因子β1对肺癌相关生物材料表皮葡萄球菌生物膜形成的影响

作     者：饶钟鸣 

作者单位：昆明医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：黄云超

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肺癌 转化生长因子β1 聚集相关蛋白基因 细菌生物膜 生物材料 

摘      要：[目的]研究聚集相关蛋白基因及转化生长因子β1对肺癌相关生物材料表皮葡萄球菌生物膜形成的影响 [方法]1.体外培养人肺腺癌A549细胞,稳定传代后,离心获得其上清液,上清液与不同浓度的转化生长因子β1(0,10,20,40ng/m1)共同作用于从人外周血中分离出来的单个核细胞,30小时后,通过流式细胞仪检测各相关免疫因子的水平。2.从非小细胞肺癌患者的胸腔引流管置入体内部分分离表皮葡萄球菌临床株,进行细菌DNA提取,通过PCR技术检测聚集相关蛋白(Aap)基因,建立稳定的聚集相关蛋白基因阴性和阳性分离株。3.医用硅橡胶与46株表皮葡萄球菌临床分离株在培养基中培养30个小时,通过半定量粘附试验测各株细菌的细菌生物膜形成情况。4.取4个不同浓度(0,10,20,40ng/m1)转化生长因子β1组共同培养上清液,加入表皮葡萄球菌聚集相关蛋白基因阴性,阳性标准株和表皮葡萄球菌聚集相关蛋白阴性,阳性临床分离株,加入医用硅橡胶作为生物材料,共同培养30小时后,取出生物材料,通过半定量粘附试验测各组细菌生物膜形成的情况,用扫描电镜观察细菌生物膜表面微观情况.实验的结果应用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。 [结果]1.不同浓度TGF-β1因子刺激下,30小时后经过流式细胞仪检测发现CD3+,CD4+CD8+细胞比率在10ng/ml组,20ng/ml组,40ng/ml组中低于空白对照组(p0.05)。 2.不同浓度TGF-β1因子刺激下,30小时后经过流式细胞仪检测发现IL-2,TNF-a,IFN-γ浓度在10ng/ml组,20ng/ml组,40ng/ml组中低于空白对照组(p0.05)。 3.医用硅橡胶与表皮葡萄球菌Aap基因阴性,阳性临床分离株在培养基中培养30个小时,半定量粘附试验表皮葡萄球菌Aap基因阴性,阳性临床分离株成膜情况：通过Fisher确切概率法发现Aap基因的存在与生物膜的形成密切相关(p0.05).医用硅橡胶与表皮葡萄球菌阴性标准株,6株表皮葡萄球菌Aap阴性临床分离株在外周单个核细胞和A549肺腺癌细胞上清液在不同浓度TGF-β1因子刺激(0ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,40ng/m1)下共同培养30小时,通过半定量方法测量结果：10ng/ml,20ng/ml,40ng/m1TGF-β1因子刺激下的各表皮葡萄球菌的厚度与空白对照组未见差异p0.05).通过各水平TGF-β1组间比较未见差异p0.05)。实验证明表葡菌Aap阴性在不同浓度TGF-β1因子刺激(Ong/ml,10ng/ml,20ng/ml,40ng/m1)均不能形成细菌生物膜。 [结论]1.转化生长因子β1对肺癌患者T淋巴细胞活化产生抑制,细胞免疫功能下降,引起Th1/Th2平衡状态失调,导致Thl为主导的机体细胞免疫功能受到抑制。 ***基因的存在与生物膜的形成密切相关,Aap基因在细菌生物膜的形成中起一定促进作用。 3.转化生长因子β1对聚集相关蛋白基因阳性的表皮葡萄球菌形成细菌