奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌红霉素耐药机制分析

作     者：丁兆凤 

作者单位：黑龙江八一农垦大学 

学位级别：硕士

导师姓名：崔玉东

授予年度：2010年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 红霉素 耐药表型 耐药基因 

摘      要：本实验对26株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的红霉素耐药机制进行分析研究。首先使用K-B药敏纸片法和常量肉汤法测定红霉素药物敏感性,通过D-试验测定其耐药表型,并应用泵外抑制剂利血平检测外排机制。然后对金黄色葡萄球菌红霉素耐药基因ermA、ermB、ermC、msrA和mefA进行PCR扩增检测。随机选取5株耐药表型并检测出耐药基因的菌株与6株表型敏感但是扩增出耐药基因的菌株进行启动子及Erm基因和23S-rDNA扩增,并进行序列分析。 26株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌经K-B药敏纸片法和常量肉汤检测,共确定20株耐红霉素菌株,耐药率为76.9%。耐药菌株的MIC值范围为64μg/mL560μg/mL;D-试验检测,共发现15株诱导型耐药菌株（D-试验阳性）和5株结构型耐药菌株（D-试验阴性）,分别占耐药菌株数的75%和25%;泵外抑制剂与红霉素联合测定耐药菌株的MIC值,发现所有耐药菌株的MIC值均没有发生变化;对26株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌进行耐药基因PCR扩增,在耐药菌株中均扩增出ermB基因和ermC基因,在6株敏感的菌株中有4株扩增出ermB基因,余下2株同时扩增出ermB基因和ermC基因,本实验没有检测到ermA、mrsA和mefA基因;对启动子及Erm基因序列进行序列分析,ermB基因及启动子序列与转座子Tn551（GenBank:Y13600.1）同源性为99%00%,ermC基因及启动子序列与金黄色葡萄球菌质粒pWBG751（GenBank:GQ900393.1）序列同源性为99%00%;一株敏感菌株ermB基因在启动子区发生A23T突变和一株耐药菌株ermC基因在启动子区发生A46G突变,其余的点突变多发生在结构基因上;对23S-rDNA进行序列分析,其与金黄色葡萄球菌newman菌株的23S-rDNA（AP009351.1）基因序列同源性均为99%;敏感菌株SH-11和SH-12均在A989G发生突变。 本实验结果表明,奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌红霉素耐药率高达76.9%,均由ermB和ermC耐药基因的存在而导致耐药,说明在我国奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌对红霉素的耐药机制中以甲基化转移酶机制占主导地位,而且本实验首次在红霉素敏感的金黄色葡萄球菌中扩增出ermB基因ermC基因。