鲤鱼小清蛋白的抗原性研究

作     者：肖有明 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：高金燕;陈红兵

授予年度：2008年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：鲤鱼小清蛋白 分离纯化 多克隆抗体 抗原性 免疫交叉反应 

摘      要：鱼类食物是人类获取优质蛋白的重要途径,但有部分人对鱼类蛋白过敏,健康受到极大威胁。有研究表明,鲤鱼和鳕鱼等鱼类中主要过敏原是小清蛋白,因而研究鲤鱼小清蛋白的抗原性将有助于预防食物过敏和生产低致敏性产品。 本研究的主要内容包括鲤鱼小清蛋白的分离纯化,兔抗鲤鱼小清蛋白多克隆抗体的制备及青鱼、草鱼、鲢鱼蛋白的粗提物与鲤鱼小清蛋白之间免疫交叉反应的研究。 通过实验,建立了以磷酸盐缓冲液粗提结合DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析分离纯化鲤鱼小清蛋白的方法;SDS-PAGE和PAGE鉴定结果表明,用这种方法可以获得纯度90%的鲤鱼小清蛋白样品。 本实验建立了间接ELISA检测兔抗鲤鱼小清蛋白抗血清效价的检测方法及制备兔抗鲤鱼小清蛋白多克隆抗体的方法。免疫两只日本雄性大白兔分别获得了间接ELISA检测效价高达1:560,000和1:720,000的抗血清。结合间接竞争ELISA实验对鲤鱼小清蛋白的抗原性进行了分析和评价,研究结果表明,鲤鱼小清蛋白具有很好的抗原性。 通过免疫印迹和间接竞争ELISA实验,证实了鲤鱼小清蛋白和青鱼、草鱼、鲢鱼粗提蛋白之间存在免疫交叉反应,发生交叉反应的主要蛋白分子量约为12kDa。