VEGF shRNA表达质粒抑制血管内皮细胞VEGF表达及角膜新生血管的研究

作     者：费春梅 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周善璧

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：血管内皮生长因子 RNA干扰 短发夹RNA 血管内皮细胞 角膜新生血管 

摘      要：目的:探讨RNA干扰对血管内皮细胞(ECs)中VEGF表达及大鼠碱烧伤后角膜新生血管(CNV)是否具有抑制作用。方法:用DNA重组技术设计合成针对VEGF mRNA的3条shRNA寡核苷酸片段,构建真核表达质粒VEGF shRNA1、VEGF shRNA2和VEGF shRNA3,然后将质粒通过脂质体介导分别转染ECs,RT-PCR和Western blot分别检测ECs中VEGF mRNA和蛋白表达及干扰效率,并筛选出干扰效率最高的质粒(VEGF shRNA3质粒)进行体内实验。建立大鼠碱烧伤后CNV模型,实验组于结膜下注射VEGF shRNA3质粒后,显微镜下观察CNV生长情况,7天后利用RT-PCR及Western blot分别检测角膜组织VEGF mRNA和蛋白的表达。结果:经酶切及测序证实重组质粒构建成功。VEGF shRNA1、VEGF shRNA2和VEGF shRNA3质粒均可下调ECs中VEGF mRNA和蛋白的表达,其中VEGF shRNA3质粒的抑制作用较强,VEGF mRNA和蛋白的抑制率分别为68.92%和66.22%。VEGF shRNA3质粒转染细胞后48h和72h的VEGF mRNA和蛋白抑制率均较24h高,48h和72h间差异无统计学意义。体内实验中实验组CNV面积明显减少,VEGF mRNA和蛋白在角膜组织中的表达明显降低,抑制率分别为41.84%和41.86%。结论:构建的VEGF shRNA质粒能有效抑制ECs中VEGF mRNA和蛋白的表达。结膜下注射VEGF shRNA3质粒能有效抑制碱烧伤后CNV的形成及VEGF的表达。