大豆异黄酮的提取、精制及分离分析

作     者：于阿娟 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张书胜;冶保献

授予年度：2004年

学科分类：081702[工学-化学工艺] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

主      题：大豆异黄酮,大豆皂甙,提取,精制,HPLC,HPCE 

摘      要：大豆异黄酮和皂甙是大豆中的两种主要活性成分，是近年来食品与营养学研究的热点之一，其中大豆异黄酮具有降胆固醇、抗防骨质疏松、缓解更年期综合症等有益的生理作用;大豆皂甙具有降血脂、降胆固醇、抗氧化、抗癌、增加免疫力等作用，可广泛应用于药品、保健食品及饮料添加剂中。本论文研究了脱脂豆粕中异黄酮和皂甙的提取工艺、分离纯化的方法条件，研究建立了用于其进行分离分析的HPLC和HPCE现代分离分析方法。 1．本文通过对比实验进行了大豆异黄酮提取物的除脂、除蛋白及除糖研究，提出了其工艺路线：异黄酮的乙醇提取液冷藏48h后，在3600r／min下离心10min，上清液浓缩，冷藏24h后去脂，再用6mol／l的HCl调至等电点，冷藏72h后离心，上清液调至中性后上柱，以水洗脱糖、盐及水溶性色素等，以30％、60％、95％乙醇洗脱大豆异黄酮，或直接用75％的乙醇洗脱，浓缩得粗提物Ⅰ。 2．本文研究了用溶剂沉淀法和各种柱色谱法分离纯化大豆皂甙和异黄酮甙的方法，结果表明采用硅胶柱，用氯仿—甲醇—水(65：35：10，v／v／v，下层)为洗脱剂，可依次洗脱分别获得纯度优于90％总异黄酮和90％总皂甙;采用聚酰胺柱，用甲醇—乙酸乙酯梯度洗脱，大豆皂甙类物质和异黄酮类物质整体分离较好：用葡聚糖凝胶LH-20柱，采用用50％甲醇洗脱时，大豆皂甙类物质和异黄酮类物质基本上得到了分离。 3．考察了缓冲溶液的pH值和浓度对现有的三种标准品染料木素(genistein)、染料木甙(genistin)和大豆甙(daidzin)的替代品葛根素(puerarin)的毛细管电泳(CE)分离行为的影响，确立了大豆异黄酮的最佳分离条件，并在此条件下测定几种大豆总异黄酮甙产品中genistein、daidzin、genistin的含量。 4．分别对三种异黄酮质谱电离条件进行了优化和选择，并对异黄酮粗提物Ⅱ中的异黄酮进行了液质联用分析，利用异黄酮标准品对照和MS的特征离子对色谱峰进行确认，利用紫外检测峰面积对大豆异黄酮的含量进行了定量测定，与HPCE法的测定结果进行了比较，结果相近。