血浆miRNA-372/373与HBV早期感染的相关性研究

作     者：安蓬蓬 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：汤华

授予年度：2015年

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

主      题：微小RNA miRNA-372 miRNA-373 献血者筛查 HBV早期感染 

摘      要：目的:目前,在采供血机构中进行血液筛查时,乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)的E LISA检测和核酸扩增检测技术(NAT)的平行使用已被大范围推广,尤其是N AT的使用,在很大程度上缩短了HBV感染的检测窗口期,提高了输血的安全性。但受病毒复制及核酸拷贝数等因素的影响,NAT也并不能完全杜绝HBV经输血途径的传播。micro RNA(mi RNA)是一类微小的、单链的RNA分子,它的长度约为21-25nt,它能够通过与目标m RNA的3’-UTRs的不完全配对,来调节目标m RNA的稳定性或抑制其翻译。人们已经发现,mi RNAs在血浆中的差异表达与多种疾病密切相关,而且,它可以在血浆中稳定存在,可作为疾病诊断的分子标记物。本文应用实时定量PCR方法检测HBV早期感染的无偿献血者血浆中和正常献血者血浆中的mi RNAs(mi RNA-372/-373)的表达差异,进而分析这两种mi RNA作为HBV早期感染诊断标志物的潜在价值和对献血者进行HBV筛查的可行性。方法:收集来源于2013年3月至9月间天津市内无偿献血者所献血液的血浆标本留样,共54份,均经过ELISA检测及核酸检测,其中ELISA检测HBs Ag及核酸检测HBV核酸均为阴性的正常的血浆标本18份(正常组);仅ELISA检测HBs Ag阳性而核酸检测HBV核酸阴性的标本18份(E单阳组);ELISA检测HBs Ag及核酸检测HBV核酸均为阳性的标本(EN双阳组)18份(此54份血浆标本的其他常规血液筛查项目均正常,相应的献血者体检符合中华人民共和国卫生部于2011年12月30日发布的《献血者健康检查要求》,HBs Ag阳性的相应献血者均为无明显症状的轻度早期感染者)。提取此3组共54份血浆标本中的mi RNA,并用实时定量PCR方法检测mi RNA-372和mi RNA-373的相对表达水平。最后,分别比较mi RNA-372和mi RNA-373在“E单阳组、“EN双阳组的HBV早期感染者与正常献血者之间的表达差异,并对各组间的mi RNA表达趋势进行统计学分析;同时,对mi RNA-372、mi RNA-373的相对表达水平分别与核酸检测HBV核酸阳性血浆标本中的HBV DNA拷贝数进行相关性分析。结果:经实时定量PCR检测,与正常献血者相比,mi RNA-372、mi RNA-373在“E单阳组和“EN双阳组中均表达上调,其中,mi RNA-372、mi RNA-373在“EN双阳组中表达上调更为显著。进一步分析发现,在“EN双阳组中,mi RNA-372、mi RNA-373均与相应的HBV DNA拷贝数呈正相关性,其中,与mi RNA-372相比,mi RNA-373与相应的HBV DNA拷贝数的正相关性更为明显。结论:mi RNA-372、mi RNA-373在HBV早期感染者血浆中的相对表达水平均较正常献血者上调,且与相应的HBV DNA拷贝数呈正相关性。提示mi RNA-372、mi RNA-373与HBV早期感染密切相关,在HBV感染的早期诊断中具有潜在应用价值,有望为献血者进行HBV筛查和HBV早期感染的诊断和治疗提供新的依据和方法。