IL-17F对大鼠成骨细胞BMP-2及Noggin mRNA表达的影响

作     者：曹鲁宁 

作者单位：山东大学 

学位级别：硕士

导师姓名：于灵芝

授予年度：2015年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主      题：IL-17F 成骨细胞 BMP-2 Noggin 

摘      要：目的骨细胞和免疫细胞共同起源于骨髓细胞,它们在功能上也有一定的相连,并且受一些相同细胞因子的影响。最近有研究显示IL-17因子家族中的一个重要成员IL-17F在体内具有促进成骨细胞的作用,但是相关研究甚少。本研究通过提取并培养大鼠原代成骨细胞,以不同浓度的IL-17F刺激成骨细胞,观察IL-17F对成骨细胞的增殖能力、骨形态发生蛋白2 (Bone Morphogenetic Protein 2, BMP-2)及BMP-2抑制因子Noggin mRNA表达的影响。方法1.大鼠原代成骨细胞的提取、培养及鉴定新生24h内的Wistar大鼠8只,脱颈处死后,于无菌操作下取出颅骨,完全去除骨膜、血管及结缔组织,反复冲洗骨片至透亮,将骨片剪碎后,运用胰酶-胶原酶消化法及组织块法提取原代成骨细胞。将提取的原代成骨细胞加适量培养液于培养箱内进行培养,并在传代时运用差速贴壁法对成骨细胞进行纯化,取纯化后的第4代成骨细胞进行实验。采用形态学观察及碱性磷酸酶(ALP)染色法对成骨细胞进行鉴定。2.实验分组及IL-17F刺激将纯化后的第4代大鼠成骨细胞随机分为正常对照组和实验组。对照组使用正常培养液进行培养;实验组分别用正常培养液配制的含有不同浓度(lng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml) IL-17F的培养液进行培养,共5个实验组,分别于干预第1、3、5天后进行指标检测。3.指标检测(1)采用MTT法检测成骨细胞增殖活性。(2)采用RT-PCR检测成骨细胞BMP-2及Noggin mRNA的表达。结果1.大鼠原代成骨细胞培养与鉴定：培养的原代成骨细胞贴壁生长稳定,细胞形态和生长状况均符合成骨细胞的特征。ALP染色结果显示,大量阳性细胞胞核及胞质内可见ALP染色成的灰黑色颗粒或块状深染沉淀,鉴定为成骨细胞。***-17F对成骨细胞增殖的影响MTT结果显示,与对照组相比,第1天时只有100ng/ml实验组细胞增殖率明显升高(P0.05);第3天与第5天时,10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组细胞增殖率均显著升高(P0.05)。***-17F对成骨细胞BMP-2及Noggin mRNA表达的影响RT-PCR结果显示,与对照组相比,20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组BMP-2 mRNA表达水平从第1天开始就明显升高(P0.05)。与对照组相比,lOng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml实验组Noggin mRNA表达水平均从第1天开始就显著降低(P0.05)。结论一定浓度的IL-17F可以促进体外培养的大鼠成骨细胞增殖,提高大鼠成骨细胞BMP-2 mRNA表达,降低Noggin mRNA表达,并且呈一定的剂量-时间依赖性。