基于循环放大技术细胞内小分子活性物质的检测

作     者：付友健 

作者单位：青岛科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：瞿斌;郭英姝

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 100214[医学-肿瘤学] 0703[理学-化学] 10[医学] 

主      题：纳米粒子 荧光 电致化学发光 APS GSH 肿瘤细胞 

摘      要：第一章,首先对肿瘤细胞的形成和检测做了介绍,对化学发光、电致化学发光、荧光进行了介绍,并对用到电致化学发光和荧光的文献进行了分析,了解了其基本原理和当前检测的趋向,并明了了当前的检测水平。 第二章,我们制备了鲁米诺金胶纳米粒子(luAu NPs),由于其本身的特殊性,这种金纳米粒子具有电致化学发光、荧光等特性。由于GSH具有打断双硫键的特性,我们建立了鲁米诺金胶(luAu NPs)荧光检测体系来检测GSH的含量,并可以检测细胞内GSH含量。GSH的检测限为2.0×10-7M,并可以检测100-1000个K562细胞。 第三章,以合成的鲁米诺金胶(luAu NPs)为基础,本章设计了一个基于APS增强电致化学发光循环放大检测肿瘤细胞的方法,不仅可以灵敏、特异性的响应靶细胞,还可以用于灵敏的检测靶DNA。能够快速、简便的检测电极表面一锅煮的方式产生的循环放大信号。APS能够增强鲁米诺ECL信号。优化实现条件后,可以对2.0×10-16-1.0×10-13M范围内的DNA有响应,检测限可以达到2.0×10-16M。并可以对10-1280个靶细胞进行检测,检测限可以达到10个靶细胞。在生物分析领域具有很好的应用前景。 第四章,制备了氧化石墨烯(Go),并用透射电子显微镜(TEM)进行了表征。通过等温循环放大技术、以氧化石墨烯(GO)作为纳米容器来装载ssDNA和双硫键结合的DNA发卡,对GSH进行分析检测。对1.0×10-10M-I.0×10-7M的GSH具有响应,检测限可以达到1.0×10-10M,对10-1000个K562细胞进行了检测,检测限为10个K562细胞。这个方案具有高灵敏度和高特异性,并且对癌细胞中还原型生物巯基化合物的分析,具有非常重要的意义。