多发性硬化治疗中的补泻方法和补泻成分配伍对髓鞘修复的作用研究

作     者：程翠翠 

作者单位：北京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：樊永平

授予年度：2018年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：补泻成分 多发性硬化 少突细胞转录因子1 少突细胞转录因子2 

摘      要：目的多发性硬化(multiple sclerosis,MS)为免疫介导的中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘疾病。其反复发作的病程特点以及高致残率导致本病的预后不佳。本研究的目的包括两部分,第一部分,对经樊永平教授诊治的112例MS患者的中医临床病例资料进行数据挖掘,探讨其用药经验和MS证候分布规律等,从而丰富中医辨证治疗MS的理论,指导临床与实验研究,同时为第二部分研究的内容提供了临床依据。第二部分为通过观察补肾益髓胶囊中的有效成分梓醇、大黄素对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠大脑内少突细胞转录因子(oligodendrocyte transcription factor,Olig)1和Olig2表达的影响来探讨补肾益髓胶囊中补泻配伍对髓鞘修复的作用机制。方法第一部分为选取2010年12月到2017年12月期间于首都医科大学附属北京天坛医院中医科就诊的MS患者。符合纳入标准共112例,均由樊永平教授进行过辨证及开具处方,利用频数分析方法对患者一般信息、临床症状、辨证分型、用药规律进行分析,探讨MS中脏腑虚损与风痰湿热瘀等证候要素的意义以及樊永平教授治疗MS的补泻用药规律。第二部分将80只C57BL/6小鼠,随机分为正常组、模型组、激素组、配伍组(梓醇40mg/kg、大黄素1mg/kg),每组20只。模型组、激素组、配伍组通过皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 35-55(myelin oligodendrocyte glucoprotein 35-55,MOG35-55)多肽诱导产生EAE。于免疫诱导后第18天(症状高峰期)及第40天(症状缓解期)进行取材。透射电镜(transmission electron microscoe,TEM)观察髓鞘脱失情况,蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)观察Olig1、Olig2蛋白的表达情况。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,Real-time rt-PCR)观察Olig1、Olig2基因表达情况。结果112例MS患者中医辩证以肾虚(肝肾阴虚)型最多,共72例,其中单纯肾虚型20例,合并肝阴虚者52例。辨证属气虚为主者,共31例。112例患者中辨证有瘀者,共105例。辨证有痰者,共72例。痰瘀并见者,共71例。MS的病机以肾虚为本,痰、瘀、湿、热、内风等为标实因素。患者就诊时包括最多的前三类症状分别是二便障碍、肢体麻木、肢体无力,首发症状中出现频率最高的前三类症状分别是肢体麻木、肢体无力、视力减退治疗用药包括补益类药(气血阴阳)占比23.0%,泻实邪类(活血药、清热药、平肝熄风药、解表药、理气药、化痰药、祛风湿药、利水渗湿药、开窍药、泻下药、化湿药、消食药)占比72.1%,其他(安神药、收涩药、止血药),占比4.9%。梓醇、大黄素合用能够显著减轻EAE小鼠髓鞘损伤,降低症状高峰期及症状缓解期神经功能评分,TEM显示配伍组髓鞘环形层状结构较模型组小鼠破坏松散程度减轻,WB结果显示第40天配伍组较模型组Olig2蛋白表达升高(P0.05)。Real-time rt-PCR结果显示第18天及第40天配伍组较模型组Olig1、Olig2基因表达均升高(P0.05)。结论112例MS患者中医辩证以脏腑亏虚之肾虚(肝肾阴虚)为主者最多,痰瘀是贯穿MS病程始终的因素,且以痰瘀并见最多,治疗用药符合补泻兼施。补肾益髓胶囊中补泻成分配伍能够缓解EAE髓鞘损伤,增加EAE小鼠脑内Olig1,Olig2的表达,对髓鞘再生具有一定的促进作用。