基于雌激素受体和过氧化物酶体增殖子激活受体的药物筛选及药理学研究

作     者：宁萌萌 

作者单位：中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 

学位级别：硕士

导师姓名：王明伟

授予年度：2006年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：雌激素受体 拮抗剂 乳腺 子宫 选择性雌激素受体调节剂 过氧化物酶体增殖子激活受体 糖尿病 激动剂 3T3-L1细胞 分化 

摘      要：雌激素受体属于核受体超家族,是一类重要的核转录因子。它在生殖系统、心血管、中枢神经系统及骨骼组织发挥着重要的生理作用,是治疗乳腺癌和骨质疏松等疾病的重要靶点。 本论文根据雌激素受体发挥转录激活作用的原理建立了基于雌激素受体转录活化的细胞水平筛选模型,并应用于化合物的活性研究,对代表性化合物Y134在去卵巢动物模型中进行了药效学评估。主要结果如下: 细胞瞬时转染雌激素受体表达载体和含有雌激素受体应答序列的报告基因载体,以配体通过雌激素受体诱导报告基因表达水平改变为检测指标,建立了该受体细胞水平的筛选模型,评价相关化合物的激动或拮抗活性。经受体-配体竞争结合实验筛选获得的阳性化合物在上述模型中显示出良好的拮抗活性,而雷洛昔芬在10μM时具有微弱的激动活性。经改造的化合物Y134具有与之相当的拮抗活性和雌激素受体α亚型的选择性,在10μM浓度下无激动活性。在此基础上构建了去卵巢动物模型,应用多种方法对Y134的体内活性进行了评价。Y134在其靶器官乳腺和子宫均表现出良好的拮抗效果:其在子宫的拮抗效果与雷洛昔芬相当,而在乳腺中的拮抗效果强于雷洛昔芬。这一结果为研发新一代用于治疗乳腺癌的选择性雌激素受体调节剂提供了方向。 过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)是核受体超家族的成员,在体内发挥着重要的生理作用,与脂肪代谢紊乱、糖尿病、动脉粥样硬化、炎症和某些癌症密切相关。以其为靶点开发的噻唑烷二酮类药物(Thiazolidinediones,TZDs)是常用的胰岛素增敏剂,能显著改善胰岛素抵抗,对2型糖尿病有明显的疗效,但伴随体重增加、水肿等副作用。因此,发现以PPARγ为靶点的、无上述副作用又同时保留胰岛素增敏性的新化合物是许多新药研究人员的重要课题。 通过对国家新药筛选中心样品库进行高通量筛选,发现了12个与PPARγ具有较好的结合活性的化合物。如SH00012671具有新颖结构,与PPARγ的结合活力高达186.7 nM(Ki)。以其为母核结构经过结构优化改造获得一系列化合物。本论文通过建立细胞水平筛选模型评价了SH00012671及其衍生物的激动活性。并以3T3-L1细胞检测了它们诱导前脂肪细胞分化的能力。SH00012671在细胞水平显示激动活性,但不能诱导前脂肪细胞分化;其结构优化后的衍生物体现了诱导前脂肪细胞向终末期分化的能力,为进一步合成活性较高的化合物奠定了基础。