Nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的作用

作     者：高放 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：易岂建

授予年度：2011年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主      题：Nesprin-1 C2C12肌原细胞系 分化 RNA干扰 胚胎干细胞 心肌细胞 RNA干扰 

摘      要：第一部分Nesprin-1在C2C12肌原细胞系分化过程中的作用 目的探讨Nesprin-1,一个新发现的含多个血影蛋白重复序列的细胞骨架蛋白家族成员,在肌细胞分化过程中的作用。 方法 1.将C2C12肌原细胞细胞分化成肌小管。 2.采用Western-blotting和免疫荧光技术检测Nesprin-1蛋白表达水平和亚细胞定位在肌小管分化成熟过程中的改变。 3.利用RNA干扰技术抑制Nesprin-1蛋白的表达,观察对C2C12肌原细胞分化的影响。 结果 ***-blotting结果显示nesprin-1各亚型在C2C12肌原细胞系分化过程中表达水平有所改变。 2.免疫荧光结果显示nesprin-1各亚型在C2C12肌原细胞系分化过程中细胞中定位有明显改变。 3. Nesprin-1 siRNA组与对照组相比,分化前后C2C12细胞中nesprin-1蛋白表达明显降低。 4. Nesprin-1 siRNA组与对照组相比,分化后肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白（myosin）的表达量以及肌小节的数量比对照组均明显减少（P0.001）。 结论nesprin-1对骨胳肌细胞分化至关重要,不同分子大小nesprin-1亚型在C2C12肌原细胞分化过程中发挥各自特殊作用,在该细胞质与细胞核中作用不同。 第二部分Nesprin-1在小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的作用 目的探讨nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的作用。 方法 1.采用悬滴-悬浮-贴壁三步法,5-氮杂胞苷（5-azacytidine ,5-aza）与丹参共同诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞。 2.采用western-blotting与免疫荧光技术检测nesprin-1蛋白表达水平和在分化成熟过程中的改变。 3.同时利用RNA干扰（RNAi）技术抑制nesprin-1蛋白的表达。Ⅰ组（RNA干扰目的序列AAAGCCAAGCACGCAACTA）,Ⅱ组（RNA干扰目的序列GGGAACCAACAGTGAGATT）,Ⅲ组（RNA干扰目的序列ACCAGGACATTGCGTACTA）,Ⅳ组对照组,观察对胚胎干细胞分化的影响。 结果 ***-1各亚型在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达水平有所变化。 2.各干扰组分化后心肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白（myosin）的表达量减少。 3.各组心肌细胞分化率分别为（17.78±1.92）%,（36.67±3.34）%, （44.42±5.08）%,（77.78±1.92）%,各干扰组与对照组相比,差异具有统计学意义（P0.05）。 结论 本文首次证实nesprin-1亚型在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中至关重要,不同分子大小的nesprin-1亚型在此分化过程中发挥各自特殊的作用,某些亚型可能有更加重要的作用。