G蛋白偶联受体30介导雌激素对小鼠子宫中TLR4表达的影响

作     者：刘红改 

作者单位：西北农林科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：赵慧英

授予年度：2014年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：G蛋白偶联受体30 雌激素 Toll样受体4 免疫组织化学SP法 实时荧光定量PCR 

摘      要：雌激素对子宫的局部免疫有直接或间接的影响和调节作用。Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR4）作为Toll样受体超家族成员之一，在免疫防御中发挥重要功能而参与子宫的免疫调节。研究表明，雌激素的分泌水平影响子宫中TLR4的表达和作用，且通过雌激素受体的介导发挥其生理效应。已证实经典的雌激素核受体参与雌激素的子宫局部免疫调节作用，而近年来发现的新型雌激素膜性受体G蛋白偶联受体30（Gprotein-coupled receptor30，GPR30）介导雌激素对子宫的免疫调节作用尚未见文献报道。因此，本试验采用免疫组织化学SP法及实时荧光定量PCR技术研究GPR30介导雌激素对小鼠子宫中TLR4表达的影响。获得以下研究结果： 1.发情周期小鼠子宫中GPR30、TLR4的分布与表达规律 发情周期小鼠子宫的内膜层、肌层和浆膜层均有GPR30和TLR4免疫反应阳性产物不同程度的分布，且主要以子宫内膜上皮及腺上皮、间质中阳性着色最深、阳性细胞最多，肌层和浆膜层分布较少。GPR30和TLR4的免疫反应阳性产物在发情周期的4个时期中，以发情期子宫内膜上皮及腺上皮中染色最深、呈强阳性分布，发情后期逐渐减弱，至间情期最浅、呈弱阳性分布;子宫间质中二者的分布趋势同子宫内膜上皮及腺上皮;肌层和浆膜层中GPR30和TLR4免疫反应阳性产物总体较浅，相对以发情期着色深，其它时期着色程度无明显区别。 对不同时期子宫中GPR30和TLR4的相对表达量比较分析发现，二者均在发情期相对表达量最高，极显著高于其它3个时期（P0.05）。各时期子宫中GPR30和TLR4的相对表达量均在子宫内膜层高，肌层和浆膜层低。其中，GPR30在各时期子宫内膜上皮及腺上皮、内膜间质的相对表达量变化同子宫中总体的相对表达量变化;TLR4在内膜上皮及腺上皮的相对表达量变化也与子宫中总体的变化相一致，而内膜间质中TLR4的表达在各时期间呈极显著差异（P0.05）;对去卵巢小鼠给予G15后，TLR4的相对表达量随G15浓度的升高而升高，低、中、高浓度组间TLR4的相对表达量显著性变化差异同OVX+G1组。实时荧光定量qRT-PCR结果显示，各组小鼠子宫中TLR4mRNA的表达量变化与TLR4相对表达量变化基本一致。 以上结果表明，GPR30能介导雌激素抑制子宫中TLR4的表达，进而参与子宫的局部免疫功能调节。