共聚焦显微镜下糖尿病兔的角膜病变研究

作     者：何艳花 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈剑

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：糖尿病 角膜 共聚焦显微镜 Caspase-3 

摘      要：目的：1.采用共聚焦显微镜对糖尿病兔角膜组织的三维立体结构进行活体观察，了解糖尿病角膜组织病变的病理形成过程。2.糖尿病兔角膜组织切片HE染色，并与活体共聚焦显微镜的观察结果结合起来，宏观分析糖尿病角膜病变的发病机制。3.通过免疫组织化学方法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)在糖尿病兔角膜组织的表达水平，并观察角膜细胞与caspase-3表达变化的关系，蛋白水平分析糖尿病角膜病变发病的分子机制。 方法：1.四氧嘧啶静脉注射新西兰兔（18只），并给予高糖高脂饲料喂养来复制糖尿病模型;对照组新西兰兔（3只）给予同等剂量的生理盐水注射，且普通饲料喂养。2.分别在给药前和疾病模型建立后4w,8w,12w采用角膜共聚焦显微镜进行活体观察。3.分别在疾病模型建立后4w,8w各处死3只糖尿病兔，12w处死12只糖尿病兔和对照组3只正常新西兰兔，角膜组织切片HE染色，显微镜下观察。4.免疫组化观察角膜组织切片Caspase-3的表达，并与共聚焦活体观察和角膜组织切片HE染色的结果结合，综合分析和研究糖尿病角膜病变的发病机制。 结果：1.糖尿病兔血糖增高显著，血糖最低17.3mmol/L,最高31.2mmol/L，平均22.97±4.03mmol/L。2.随着糖尿病模型建立时间的延长，糖尿病兔角膜逐渐出现不同层次的上皮脱落且脱落的面积逐渐增大。前、后基质细胞数目减少,基质水肿，基质细胞核出现形态改变。内皮层多形性细胞增加，内皮细胞数目减少。上皮下神经纤维出现弯曲，变形等形态学改变。基质神经纤维分枝减少，神经出现断裂。3. Caspase-3在糖尿病兔角膜组织的上皮和基质层都有表达，且随着糖尿病时间延长，Caspase-3表达增强。 结论：糖尿病血糖增高导致糖尿病角膜病变的发生。随糖尿病疾病时间的延长，角膜神经纤维和角膜上皮细胞核均发生变性，且上皮细胞凋亡、脱落;角膜基质细胞排列疏松，水肿，细胞核变形，凋亡。我们考虑糖尿病角膜上皮细胞和基质细胞的这些病变与角膜神经纤维变性有关。在没有角膜神经分布的角膜内皮层，角膜内皮细胞最先被观察到出现细胞形态改变，暗示这可能与角膜内皮与房水直接接触相关。