雌二醇对腺样囊性癌细胞的增殖和转移作用的研究
作者单位：第四军医大学
学位级别：硕士
导师姓名：吴军正
授予年度：2004年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
摘 要：激素和激素样物质是控制细胞分化和增殖的重要因素。有资料表明，雌激素受体(estrogen receptor，ER)不仅存在于乳腺、子宫等各器官靶细胞中，在许多非靶器官组织如肝、肾、结肠、胰、口腔粘膜甚至皮肤也能测出雌激素受体，雌激素受体在肿瘤组织中的存在也逐渐引起人们的重视。目前大量的雌激素仍在用于各种临床治疗，雌激素与肿瘤的关系日益成为人们的研究热点。美国食品药物管理局(FDA)在2002年公布的7种致癌物中，雌二醇(E2)名列榜首。已有大量文献报道E2对胃癌，子宫内膜癌，乳腺癌，胰腺癌等有促增殖作用，但目前对E2是否能促进腺样囊性癌细胞增殖和转移的研究尚未见报道。 腺样囊性癌是涎腺最常见的恶性肿瘤之一，约占涎腺恶性肿瘤的27％，是颌下腺及小涎腺最常见的肿瘤之一，虽生长相对缓慢，但以其侵袭性强，手术后易于复发及转移为其临床特点。 本研究根据E2临床用药在体内的药物浓度，利用由北京医科大学颌面外科建立的腺样囊性癌(SAcc83)来进行实验，探讨E2对腺样囊性癌细胞增殖和转移的影响，为临床用药、预防和治疗提供一定的理论依据。 本实验体外实验采用MTT法、细胞计数、细胞分裂指数、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪、免疫细胞化学等方法研究E2 第四军医大学硕士学位论文 对腺样囊性癌细胞增殖的影响;通过鸡胚心侵袭实验、SDS聚丙 烯酞胺凝胶电泳研究17一p雌二醇对人涎腺腺样囊性癌细胞的转 移影响情况。体内实验通过对切除卵巢后(去势)的雌裸小鼠尾 静脉注射方法建立动物转移模型和皮下致瘤实验，研究雌二醇在 体内对动物的增殖和转移能力的影响。 实验结果如下: ***法检测10一5、10一6、10一7、10一8、一。一gmol/L的EZ对 SAcc83均有促增殖作用，其中10一7mol/L作用最显著(尸0.01) 2.细胞计数法描绘细胞生长曲线，运用细胞生长曲线的测定 公式计算所得对照、10一7、10一“、10一mol/L各组的细胞群体倍增 时间分别为52.8、43.7、50.9、***，EZ作用组细胞群体倍增时 间缩短率(%)分别为17.2，3.6，10.8。 3.用细胞分裂指数法测定并描绘细胞分裂指数曲线，可以看 出对腺样囊性癌细胞施加lxlo一7mol几的EZ对细胞分裂指数影 响显著。作用1，2，3d时细胞分裂指数分别增加了33.3%，40.9 %，1 7.8%。 4.软琼脂克隆形成实验测得在lxlo一7mol/L的EZ作用下克 隆形成率增加了39.0%(P0.01)。 5.流式细胞仪进行细胞周期分析的结果显示，在lx 10一7mol/L的EZ作用下12，18，24h时s期腺样囊性癌细胞分别 增加了12.3%，3.3%和9.7%。 6.免疫组织化学结果显示在lx10一7mol/L的EZ作用下腺样 囊性癌细胞PCNA表达也相应增强。 7.鸡胚心侵袭实验结果表明lx10一7mol/L的EZ作用下腺样 囊性癌细胞和对照组腺样囊性癌细胞侵袭面积与复合体面积之 比分别为0.640士0.079和0.291士0.051，二者之间差异显著 (P0 .01)，试验组侵袭面积增加了120%。 第四军医大学孑项卜学位论文 ***聚丙烯酞胺凝胶电泳显示1 xlo一7mol/L的EZ作用下 92kDa处的基质金属蛋白酶电泳条带亮度较对照组明显增大，说 明MMP一9酶原活性较高。 9.裸鼠皮下致瘤性实验，对照组细胞皮下致瘤性8/8，瘤体 倍增时间76.5h:1 x 10一7mol几的EZ组细胞皮下致瘤性8/8，瘤 体倍增时间61.5h。接种15天后处死裸鼠，称取瘤重对照组和EZ 组分别为420.4士147.8 mg和524.6士120.7mg，试验组肿瘤比对照组增 加了24.8%。裸鼠皮下肿瘤组织切片表现为典型的腺样囊性癌的组织学 特征:不典型的筛网和小条索状结构，肿瘤细胞成片状，含大小 不等的囊腔，间质结缔组织多少不一。 10.裸鼠肺转移实验经裸鼠尾静脉注射***护/0 .2ml个细 胞42天后对照组与EZ组(每日腹部皮下注射浓度为9.55x 10一，mol/L的EZ溶液0.2ml)，EZ组所引起的肺转移结节数分别为 10.2士6.3(3、20、8、12、8)和14.4士13.7(16、13、5、36、2)， 肺转移结节形成率增加了41.2%。 实验结果表明:10一7mol/L的EZ对SAcc83细胞有明显的促 增殖作用，同时在体内实验中对SAcc83细胞也有明显的促增殖 和转移作用，提示这类雌激素应在严密监控下使用。
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