自噬相关基因Beclin-1、ATG7、ATG3、LC3在脑缺血再灌注大鼠脑组织的表达

作     者：闵鹤鸣 

作者单位：锦州医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：包翠芬

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：自噬 bcl-2同源结构域蛋白 自噬相关基因7 自噬相关基因3 自噬微管相关蛋白轻链3 缺血再灌注 

摘      要：目的探讨局灶性脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤时,受损大脑皮质中bcl-2同源结构域蛋白(Beclin-1)、自噬相关基因7(autophagy related gene7,ATG7)、自噬相关基因3(autophagy related gene 3,ATG3)和自噬微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein1 light chain3,LC3)的表达规律。方法将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)和模型组(IR组)。其中模型组又分为再灌注IR 0h、1h、3h、6h、12h、24h六个亚组。采用大脑中动脉栓塞术(middle cerebral artery occlusion,MCAO)制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型。动物苏醒后采用神经功能缺损评分,模型制备24 h后采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色及脑组织含水量方法鉴定模型是否成功。采用透射电镜观察各组大鼠大脑神经元的自噬情况,采用免疫组化和免疫印迹方法检测大脑皮质Beclin-1、ATG7、ATG3和LC3的表达规律。结果模型鉴定结果显示:sham组大鼠的行为学表现正常,神经功能未见缺损症状,脑组织未见水肿和梗死区;而IR各组大鼠均出现明显的神经功能缺损症状,IR 12h后脑组织含水量显著增高,IR 6h后可见明显的苍白梗死区,与sham组比较有显著差异。透射电镜sham组可见正常的神经元形态,而IR各组均可见到明显的神经元自噬。免疫组化染色后发现,sham组仅见少量Beclin-1阳性表达细胞,而IR不同时间点则呈现不同的表达增高趋势,其中IR 3h和IR 24h组呈现较明显的表达。免疫印迹检测Beclin-1也呈现一致的表达趋势。免疫组化和免疫印迹结果显示,ATG7、ATG3、LC3表达也呈现与Beclin-1一致的趋势。结论Beclin-1、ATG7、ATG3、LC3在调节脑缺血再灌注损伤中的细胞自噬具有重要的作用。