抗KDR（VEGFR2/FLK1）抗体体外抑制血管瘤内皮细胞增殖作用的研究

作     者：夏印 

作者单位：华中科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：金毕

授予年度：2007年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：KDR 抗KDR抗体 血管内皮生长因子 血管瘤 

摘      要：目的:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和其主要受体之一KDR(VEGFR2)在血管新生中扮演着重要的角色。VEGFR2(KDR)则主要介导内皮细胞的增殖、血管形成,引起血管通透性升高,并有抗内皮细胞调亡维持内皮细胞存活的作用。本文探讨抗VEGFR2(KDR/FLK1)抗体通过竞争性结合增殖期血管瘤细胞表面血管内皮生长因子受体2(KDR/FLK1),切断血管瘤内皮细胞生长的分子信号传导途径(VEGF→VEGFR2/KDR/FLK→内皮细胞增生→血管新生),从而抑制血管内皮生长因子(VEGF)结合血管内皮生长因子受体2 (KDR/FLK1)后产生的血管瘤内皮细胞(HVEC)增生的作用。为今后临床采用有效的药物(如选择性抗KDR药物SU5416、ZD4190、TK787)治疗血管瘤提供借鉴。 方法:取五例新鲜增殖期血管瘤手术标本,采用组织块培养法培养血管瘤内皮细胞。相差显微镜下观察细胞生长情况,并采用内皮细胞标记物vWF(von Will brand Factor)免疫组化荧光染色鉴定内皮细胞,采用多克隆抗VEGF抗体对内皮细胞爬片进行免疫组化荧光染色。血管瘤内皮细胞原代及传代培养均在M199培养液中进行,传至第3代时在培养液中加入不同浓度的抗KDR抗体进行干预实验,实验组按照抗体的不同稀释浓度分为三组,在干预前和干预后第三天、第六天、第九天分别进行细胞计数并检测细胞活性,无干预组一组为对照组。 结果:血管瘤内皮原代及传代培养均获成功,并经显微镜下观察以及内皮细胞标记物vWF免疫组化荧光染色鉴定内皮细胞。干预组在干预后72小时HVECS数目减少,在干预后第9天抗体浓度在50ug/ml(干预1组), 10 ug/ml(干预2组), 2 ug/ml(干预3组)下的细胞浓度分别为(6.11±1.25)×104/ml、(9.06±1.48)×104/ml、(17.17±1.63)×104/ml;,第9天不同浓度的抗体对HVECS的抑制率分别为干预1组84.2±1.3%,干预2组(63.6±1.5)%和干预3组(39.5±1.6)%。显示抗体对HVECS的抑制作用与抗KDR抗体的浓度成正相关关系,对照组在无干预的情况下数目显著增加,第9天细胞数目明显增加达(28.82±2.42)×104/ml,差异显著。 结论:抗KDR抗体通过封闭KDR而抑制VEGF的活性,可以明显抑制增殖期血管瘤内皮细胞生长从而发挥抑制血管瘤生长并促进血管瘤消退的作用,在血管瘤的临床治疗中具有潜在的应用前景。