血热型银屑病动物模型的建立及凉血消斑汤对其治疗作用机制研究

作     者：杜欣 

作者单位：北京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王雪茜

授予年度：2018年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：BABL/c小鼠 银屑病动物模型 凉血消斑汤 

摘      要：目的本研究拟建立血热型银屑病的动物模型并探讨凉血消斑汤对其治疗作用及机制。研究以雄性BABL/c小鼠为对象,采用干姜肉桂灌胃给药与涂抹咪喹莫特乳膏的混合方式进行血热型银屑病的造模,探讨多种因素及造模条件对血热型银屑病动物模型的持续时间及稳定性的影响,初步总结优化后血热型银屑病的动物模型的整体行为学改变和证候特点。在此基础上,以不同剂量的凉血消斑汤干预给药,观察其对BABL/c小鼠血热型银屑病动物模型皮损的干预作用。方法(1)SPF级雄性BABL/c小鼠125只,体重20-25g,10-12周龄,实验前适应性喂养3-5天,自由饮水饮食。分为空白组、模型组、血热高剂量组、血热中剂量组、血热低剂量组,每组25只,空白组背部涂抹凡士林,模型组和血热低、中、高剂量组小鼠进行常规涂抹咪喹莫特乳膏造模。血热低、中、高剂量组灌胃不同剂量的干姜肉桂水煎液,药物剂量分别为2.25g/kg、4.5g/kg、9g/kg,从实验第1天开始,第14天结束。于实验第1天到第28天观察银屑病模型的变化情况。(2)SPF级雄性BABL/c小鼠112只,体重20-25g,10-12周龄,实验前适应性喂养3天,自由饮水饮食。然后分为空白组、模型组、凉血消斑汤低剂量组、中剂量组、高剂量组、复方青代胶囊组、雷公藤多苷组一共7组,每组16只。按照实验进程,先造模再给药治疗。血热造模持续14天,于第11天开始涂抹咪喹莫特乳膏,直到第22天实验结束,于第19天、第23天取材;从第15天到22天进行治疗。空白组和模型组给予生理盐水,复方青黛胶囊组2g/kg/d给药干预,雷公藤多苷组10mg/kg/d。凉血消斑汤低、中、高剂量是27.5g/kg、55g/kg、110g/kg,每天灌胃一次,每次0.2ml。(3)整体观察各组小鼠的不同表现:以体重、PASI评分、表皮厚度、脾指数、HE染色、酶联免疫法、流式细胞等指标评价药物干预效果。结果(1)血热型银屑病的动物模型最佳造模条件是干姜、肉桂水煎液灌胃14天,于第7天开始涂抹咪喹莫特乳膏,第15天病证结合造模完成后,银屑病皮损处于高峰期,随着时间的推移,皮损状态逐渐减轻,模型组和血热低、中剂量组的皮损状态相当,血热高剂量组的皮损最严重,最佳给药量是9g/kg;(2)采用背部涂抹咪喹莫特乳膏与灌胃给药干姜肉桂水煎液的方法可使小鼠发病的皮损时间延长,皮损程度加重,是一种有效的血热型银屑病造模方法。肉眼观察小鼠皮损,皮肤出现红色的斑点、白色的鳞屑和皮肤有不同程度的增厚;在HE染色的病理切片中,模型组和血热低、中、高剂量组的小鼠表皮增厚,真皮炎症细胞浸润和毛细血管增生;PASI评分中,血热高剂量组的皮损最严重,相关甲状腺的指标T3、T4升高,脾指数升高。(3)经各项指标的动态观察发现BABL/c小鼠血热型银屑病模型有明显的特点。动物一般在2-3天内发病,皮损逐渐严重,各组PASI评分开始上升,约7天之内即可达到发病高峰期,而后进入慢性迁延期,皮损有所消退,病理损伤维持在一定的水平。(4)与雷公藤多苷组、复方青黛胶囊相比,凉血消斑汤高剂量组对于BABL/c小鼠皮损的保护作用更加明显。凉血消斑汤不同剂量对于血热型银屑病动物模型的抑制作用不同,高剂量组的综合调节作用要优于中、低剂量组。凉血消斑汤能够调节Th1/Th2、Th17/Treg淋巴细胞的平衡,通过降低TNF-γ、IL-17实现的。结论(1)通过对BABL/c小鼠血热型银屑病模型造模方法的探索,使血热型银屑病的动物模型得以建立,该血热证模型能够从病症特点方面模拟银屑病的发展,发病时间延长,皮损更严重。(2)凉血消斑汤对于BABL/c小鼠血热型银屑病动物模型有较好的治疗作用,能够抑制动物模型急性期的皮肤损伤,对免疫系统有一定的调整作用,还能改善血热症状,降低体内甲状腺激素的代谢水平。