桑枝总黄酮对肝损伤的保护作用及机制研究

作     者：邓媛 

作者单位：浙江中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：葛卫红

授予年度：2017年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：桑枝总黄酮 化学性肝损伤 肝星状细胞 氧化损伤 

摘      要：目的本研究通过构建小鼠急性化学性肝损伤模型,用以研究桑枝总黄酮在体内对肝损伤的保护作用,同时从体外实验角度对桑枝总黄酮在肝纤维化方面的作用进行探讨,旨在从整体和细胞水平、体内和体外两方面研究桑枝总黄酮抗肝损伤的作用,为其开发利用提供理论和实验依据。方法1.分别采用CCl4、AP和D-GalN经腹腔注射小鼠,以此来建立化学性肝损伤模型。各模型组中小鼠均分为正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、桑枝总黄酮高剂量组(MTTF-h)、桑枝总黄酮中剂量组(MTTF-m)、桑枝总黄酮低剂量组(MTTF-1)及阳性对照组(联苯双酯,Dimethyl Diphenyl Bicarboxynate,DDB)。MTTF各剂量组和阳性对照组分别给予MTTF(112、56、28mg/kg)和DDB(150mg/kg),连续给药7天,每天给药 1 次。末次给药 5 h 后,分别用 CCl4(0.1%)、AP(300 mg/kg)和 D-GalN(800 mg/kg)对小鼠进行腹腔注射,诱导三种急性化学性肝损伤模型。24小时后测定各型肝损伤小鼠肝脏、脾脏和胸腺指数、肝组织丙二醛(Malonyldialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)活性,并观察各组小鼠肝细胞损伤程度。同时,测定各型急性化学性肝损伤小鼠的谷丙转氨酶(Glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Glutamic-oxalacetictransaminease,AST)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性、血清白蛋白(Serum ALBumin,ALB)含量以及总抗氧化能力(Total Antioxidam Capacity,T-AOC)。此外,以CC14为诱导的化学性肝损伤为例,测定肝组织Hyp和GSH含量变化,并于光镜观察小鼠肝损伤程度。2.体外培养HSC-T6细胞,将之分为MTTF干预组及DMSO对照组。药物干预组分为5个亚组并给予不同浓度MTTF,对照组给予等体积DMSO。各组细胞经过相应处理后连续培养24 h、48 h和72 h,随后MTT法检测MTTF对HSC-T6细胞增殖的抑制作用及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达的影响。结果***14、AP、D-GalN作为诱导剂均能够给小鼠的肝脏、脾脏以及胸腺造成损伤,主要表现为代偿性肿大。不同剂量的MTTF均能够降低化学性肝损伤导致的肝脏、脾脏以及胸腺肿大,其中特别以中、高剂量的作用效果最为显著。CC14、AP、D-GalN均能够使小鼠血清中的ALT、AST、ALP水平显著上调(P0.05),降低ALB、T-AOC和SOD含量,同时促使肝组织中MDA含量增高(P0.05)。而当采用中、高剂量MTTF作用于小鼠时,能够使其血清中ALT、AST、ALP含量明显减少(P0.01),ALB和T-AOC水平显著增高(P0.01)。中、高剂量MTTF能够显著降低肝组织中的MDA含量(P0.01),提高SOD的活性(P0.01)。MTTF各剂量组对于由CC14、AP、D-GalN所诱导的肝细胞脂肪变性、肝细胞肿胀坏死以及炎性细胞浸润等均具有不同程度的缓解作用,且中、高剂量MTTF在减轻上述病理症状方面效果更为显著。***在体外能够对HSC-T6细胞的增殖产生直接抑制作用,同时该抑制作用于MTTF之间存在剂量依赖性。此外,MTTF对HSC-T6细胞中TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白表达具有明显的抑制作用。结论***对于由CCl4、AP、D-GalN引起的小鼠急性化学性肝损伤具有一定预防和保护作用,其机制可能与抗氧化损伤作用有关。***抑制肝纤维化的机制可能与其抑制肝星状细胞增殖及抑制TGF-β1/Smad3信号途径有关。