巴戟天醇提物对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的防护作用

作     者：张贺鸣 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：冯国清

授予年度：2005年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：巴戟天醇提物 心肌细胞培养 缺氧复氧损伤 脂质过氧化反应 氧自由基 一氧化氮 

摘      要：心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI)是临床上冠状动脉再通术(溶栓、冠状动脉成形术或搭桥术等)后的重要并发症与致死原因之一,其机制至今尚未完全清楚。因此,防治心肌缺血/再灌注损伤已经成为现代心脏病学的研究热点之一。近年来,中药减轻心肌缺血再灌注损伤的实验研究取得较大进展,其中有些药物已广泛应用于临床心肌缺血性疾病的治疗。巴戟天(Radix morinda officinalis)提取物可提高脑、肝组织的抗氧化酶水平,本导师组以往的研究证实巴戟天水提物对冠状动脉结扎法所导致的MIRI具有明显的保护作用,但巴戟天醇提物对离体心肌细胞是否有保护作用,目前尚未见报道。为排除神经体液等因素的影响,本课题采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,从细胞水平研究巴戟天醇提物对体外培养的心肌细胞缺血再灌注损伤的直接防护作用,并对其作用机制进行探讨。 研究方法 巴戟天乙醇提取物水溶性部分和正丁醇可溶部分均配成含生药0.1g·L、0.3g·L、0.9g·L三种浓度药液。实验采用新生1-3d的Wistar大鼠乳鼠,无菌条件下开胸取出心脏,PBS缓冲液冲洗后用0.125%胰蛋白酶反复消化,收集心肌细胞悬液,差速贴壁法纯化后制成浓度为5×10·ml的细胞悬液,接种到25ml培养瓶中培养,实验采用培养72h后的原代心肌细胞。用缺氧溶液置换正常培养液造成缺氧,用复氧溶液置换缺氧溶液模拟再灌注损伤。实验分8组:①正常