RNAi沉默人膀胱癌T24细胞VEGF-C基因表达的实验研究

作     者：李深基 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈合群

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：RNAi 血管内皮生长因子C 人膀胱癌 T24细胞 

摘      要：目的:构建VEGF-C基因siRNA的慢病毒载体,观察其对人膀胱癌T24细胞的影响。 方法:体外构建针对VEGF-C基因的siRNA的重组质粒,转染T24细胞;应用RT-PCR检测VEGF-C基因的表达。利用ELISA法检测VEGF-C蛋白的水平、MTT法检测基因干扰对T24细胞增殖的影响。 结果:阳性克隆测序结果示目的基因克隆正确,可以进一步检测该基因在细胞内的表达水平。Western Blot显示,PSC1261靶点对目的基因有显著的敲减作用,因而是最佳靶点。荧光观察结果示:T24细胞的感染效率80%。RT-PCR示靶点在T24细胞上对VEGF-C基因有显著敲减(P0.05):转染组VEGF-C基因的表达下调到对照组的15%。ELISA示基因干扰能显著降低T24细胞VEGF-C的表达(P0.05)。MTT显示RNAi抑制T24细胞的增殖(P0.05)。 结论:本实验成功地构建了VEGF-C基因靶向RNAi真核表达载体,并有效地抑制了T24细胞VEGF-C基因的表达,抑制了T24细胞的增殖。为进一步研究VEGF-C在膀胱癌淋巴管生成、淋巴结转移中作用奠定了基础。