日本榧树树皮和祁洲漏芦根的化学成分研究

作     者：张喜萍 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：史清文

授予年度：2009年

学科分类：100703[医学-生药学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：榧属 日本榧树 树皮 化学成分 结构鉴定 活性筛选 菊科 祁洲漏芦 根 广泛活性筛选 

摘      要：日本榧树(Torreya nucifera (L.) Sieb et Zucc.)为红豆杉科(Taxacaea)榧属(Torreya)植物,长绿灌木,主要分布在日本、朝鲜,在我国南京、青岛等有引种栽培。该属植物共有6种2个变种,在东南亚和北美呈洲际间断分布,其分布情况为:美国2种:加州榧(T. califonica Torreya)、佛罗里达榧(T. taxifolia Arn.),日本1种:日本榧树(Torreya nucifera (L.) Sieb et Zucc.),中国3种2变种:长叶榧树(T. jackii Chun.)、榧树(T. grandis Fort. Ex Lindl.)、巴山榧树(T. fargesii Franch.)、云南榧树(T. fargesii Franch. Var. yunnanensis (Cheng et L. K. Fu ) N. Kang.)、九龙山榧属(T. grandis Fort. Ex Lindl. Var. jiulongshanensis Z. Y. Li, Z. C. Tang et N. Kang)。 榧树的种子即中药榧子,最早记载于《神农本草经》,在历版《中国药典》中均收录,性平味甘,入肺、胃、大肠经,有杀虫消积、润燥通便之功效,主要用于治疗钩虫、蛔虫、绦虫病,虫积腹痛,小儿疳积,大便秘结等症。另外,据《中药大辞典》记载,榧花和榧根皮也可入药,榧花味苦,主水气,去绦虫;榧根皮可以用来治疗风湿肿痛,但二者在临床上应用不多。日本榧树的种子杀虫活性很强,在朝鲜民间用作杀绦虫的药物,在日本人民间则用作流产药。 目前,关于榧属植物的化学成分研究报道较少,主要围绕榧树、长叶榧树、日本榧树三种,这其中种子和叶子的研究相对较多。其种子中含有脂肪油、甾醇等成分,叶中多为二萜、倍半萜、黄酮等化合物。关于日本榧树的研究主要集中在它的叶子和心材的化学成分上,而对树皮的研究几乎没有。倍半萜、二萜、黄酮、木脂素被认为是其中重要的活性成分。相关的药理研究仍然以杀虫作用为主要方向,其它方面的相关活性(比如抗肿瘤或抗炎等生物活性)的研究不多。本文主要针对日本榧树树皮的化学成分进行系统提取分离,并对分离得到的单体化合物进行广泛生物活性筛选,以期发现新的和具有活性的单体化合物。 目的:本研究以日本榧树(Torreya nucifera (L.) Sieb et Zucc.)的树皮为研究对象,利用各种手段(硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、大孔树脂柱色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱以及重结晶等)分离纯化技术对其进行系统研究,寻找新的化学成分,并利用UV、IR、MS、H-NMR、C-NMR、H-H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY等现代化手段,完成单体化合物分子的结构鉴定,以期建立对榧属植物行之有效的单体化合物提取分离方法,丰富榧属植物的化合物库。 方法:自然干燥的日本榧树(Torreya nucifera (L.) Sieb et Zucc.)树皮(2.0 kg)室温下用甲醇冷浸提取,重复两次,每次二到三天。将所得浸液滤出合并后减压浓缩至膏状(湿重300.0 g),将其悬浮在盐水中形成悬浊液,分别用石油醚(5.1 g)、二氯甲烷(16.3 g)、乙酸乙酯和正丁醇萃取(两部分合并共重39.3 g)。本研究先后对这三部分进行硅胶柱色谱粗分离,经薄层鉴识后,进一步用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、大孔树脂柱色谱、制备薄层色谱和高效液相制备色谱反复分离得到单体化合物。并运用UV、IR、MS、H-NMR、C-NMR、H-H-COSY、HMQC、HMBC、NOESY等波谱学方法对这些单体化合物进行检测,并依据测定的图谱数据分析确定单体化合物的平面结构和立体结构。 薄层鉴识中用薄层用硅胶GF254和0.5%的羧甲基纤维素钠混合均匀后铺制的硅胶薄板展开,挥干展开剂后,现在254 nm的紫外灯下观察,用10%的硫酸乙醇或者0.5%香草醛-硫酸乙醇喷雾显色。分析型和制备型高效液相所用流动相均为甲醇-水两相溶剂,梯度洗脱,分析型高效液相流动相流速为1mL/min,制备型高效液相流动相流速为3mL/min。 结果:通过系统提取法分离日本榧树(Torreya nucifera (L.) Sieb et Zucc.)的树皮,从中得到21个单体化合物,结构鉴定确定了其中的9个化合物的化学结构,其余的结构正在解析之中。最终鉴定结果:12, 13-E-Methylozate (1),β-Sitosterol (2), 8, 11, 13-abietatriene-3, 12-diol (3), iso-Thujaplication (8), Thujaplication (14), Methyl-β-D-m