急性胰腺炎肠道菌群的变化以及其与炎症的关系

作     者：廖远行 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：祝荫

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：急性胰腺炎 肠道菌群 16S rDNA 炎症因子 

摘      要：背景:急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是消化系统的常见疾病,临床上,轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)患者不伴有器官衰竭和并发症,病情程度轻,病死率极低,而重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)患者病程早期易出现器官功能障碍,病死率可达36-50%,若后期出现继发感染,则病死率更高。近年来,越来越多的证据表明,肠道菌群在AP病情进展中发挥着重要的作用,肠道微生态的平衡可以通过调节免疫系统和代谢途径,并形成肠粘膜生物屏障,从而减少细菌过度增殖及肠源性感染的发生。目的:通过收集AP患者血清、粪便,测定血液中炎症因子、肠粘膜屏障功能相关指标,并对肠道菌群进行16S rDNA测序分析,明确AP患者肠道菌群的变化,评价肠道菌群的变化在AP患者病情进展中的作用。研究方法:自2015年7月至2015年12月纳入符合入组标准的AP患者,收集所有患者入院后的血液,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)测定血液中的炎症相关指标:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleuki n-18,IL-18),以及肠粘膜屏障功能相关指标:二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)。收集患者粪便,提取DNA,选定16S rDNA V4区段进行聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增,结合Illumina Miseq高通量测序平台测序鉴定肠道菌群组成,表达峰度,最后收集患者临床资料,进行统计学分析:1、将AP分为MAP,中度重症AP(moderately severe acute pancreatitis,MSAP),SAP三组,比较三组之间基本情况、相关指标、肠道菌群的差异;2、根据是否出现感染性并发症将MSAP、SAP患者分为感染与非感染组,比较两组之间基本情况、相关指标、肠道菌群的差异;3、将肠道菌群与相关指标进行斯皮尔曼(spearman)相关因素分析,了解肠道菌群与病情、炎症反应、肠粘膜屏障功能的关系。结果:1.共纳入ap患者116例,其中男性、女性各58例,map41例,msap52例,sap23例,年龄51.6±14.6岁,平均起病天数2.8±1.7天,血液及粪便收集时间为起病4.6±2天。***、msap、sap三组间炎症相关指标比较:c-反应蛋白(c-reactiveprotein,crp)水平:msap、sap组高于map组(p0.05)。(2)门水平:放线菌门数量,sap组较map组减少(p0.05)。(3)纲水平:β-变形菌纲数量,msap组较map组增加(p0.05)。(4)目水平:伯克氏菌目数量,msap组较map组增加(p0.05);双歧杆菌目数量,sap组较map组减少(p0.05)。(5)科水平:双歧杆菌科、乳杆菌科数量,sap组较map组减少(p0.05)。(6)属水平:有益菌双歧杆菌数量,sap组较map、msap组减少(p0.05);乳酸杆菌数量,sap组较map组减少(p0.05);faecalibacterium、butyricicoccus属数量,msap组较map、sap组增多(p0.05)。(7)种水平:有益菌普拉梭菌、butyricicoccuspullicaecorum菌数量,msap组较map、sap组增多(p0.05);罗伊氏乳酸杆菌,sap、msap组较map组减少(p0.05)。4.感染组与非感染组比较:(1)感染组入院24h急性生理与慢性健康(acutephysiologyandchronichealthevaluation-ii,apache-ii)评分、48hapache-ii评分、住院天数、icu住院天数、dao水平均高于非感染组(p0.05)。(2)感染组有益菌丁酸梭菌、butyricicoccuspullicaecorum菌数量较非感染组