基于甲基化修饰探讨加减养心通脉方对冠心病血瘀证及亚型CTNNB1、DES基因表达的影响研究

作     者：向忠军 

作者单位：湖南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：瞿延晖;李杰

授予年度：2015年

学科分类：100506[医学-中医内科学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：冠心病血瘀证 CTNNB1基因 DES基因 甲基化修饰 加减养心通脉方 

摘      要：目的：通过DNA甲基化芯片检测非血缘性冠心病血瘀证DNA甲基化差异基因,从中筛选出CTNNB1和DES基因,“以方测证通过加减养心通脉系列方对非血缘性冠心病(气虚、痰浊、气滞)血瘀证亚型进行中药干预,探讨冠心病血瘀证易感基因甲基化修饰和表达的作用机制,为中医药临床防治冠心病及血瘀证提供思路和理论依据。 方法：采用Infinium Human Methylation450BeadArray芯片检测基因DNA甲基化方法(对收集的非血缘性冠心病血瘀证组3例,冠心病非血瘀证组3例与健康对照组3例检测),检测冠心病血瘀证DNA甲基化差异基因,从中选出非血缘性冠心病血瘀证CTNNB1、DES两个甲基化改变的易感基因,并比较三组相关临床资料;采用RT-PCR技术对非血缘性冠心病血瘀证亚型进行加减养心通脉方干预,检测干预前后候选基因表达程度。课题中药干预前共收入23病例为实验组(冠心病气滞血瘀证组、冠心病痰浊血瘀证组各8例、冠心病气虚血瘀证组7例),中药干预后共收集18例血样(气滞血瘀证6例、痰浊血瘀证6例、气虚血瘀证6例)对所选两个易感基因的表达程度及血脂、血糖指标进行干预前后对比,探讨养心通脉方对非血缘性冠心病(气虚、痰浊、气滞)血瘀证亚型CTNNB1、DES两个基因表达、DNA甲基化修饰及血脂影响,并比较三组治疗前后相关临床资料。 结果：选取肌间线蛋白(Desmin DES)、连环蛋白(cadherin-associated,beta1,88kda CTNNB1)两个易感DNA甲基化基因;血糖、血脂指标在非血缘性CHD非血瘀证组,CHD血瘀组,与正常对照组间的差异无统计学意义(P0.05),各组间的两两比较亦无统计学意义(P0.05);但是血糖值在冠心病血瘀证及非血瘀证组都明显高于正常组;血脂TC、TG、LDL-C值在冠心病血瘀证及非血瘀证组明显高于正常组;HDL-C值在正常组略高于冠心病血瘀证及非血瘀证组。 不同冠心病证型在中药治疗后,相比治疗前DES基因表达均明显所下降,且有统计学意义,其中痰浊血瘀证组(P0.05);不同证型的患者在治疗后,相比治疗前血糖、TC、TG、HDL、LDLC值均有所下降,各组之间比较没有统计学意义;通过自身配对符号秩和检验,气虚血瘀组前后血糖值改变有统计学意义(P0.05)。 结论： 1.非血缘性冠心病血瘀证存在明显的血脂紊乱情况;***基因和CTNNB1基因的DNA甲基化修饰可能是冠心病血瘀证的易感危险因素;3.加减养心通脉方可以明显改善冠心病血瘀证亚型脂类及血糖异常,有很好的降糖、脂类作用;4.加减养心通脉方能对冠心病(气滞、痰浊、气虚)血瘀证三个亚型DES基因表达有明显的调控作用,但对CTNNB1基因表达无明显的调控作用;进一步证实了DES基因的甲基化修饰是冠心病血瘀证的发病机制之一。