中华眼镜蛇蛇毒免疫调节作用及机制探讨

作     者：寇建群 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：秦正红

授予年度：2014年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：中华眼镜蛇蛇毒 固有免疫 体液免疫 细胞免疫 地塞米松 

摘      要：目的：探究中华眼镜蛇蛇毒(Naja naja atra venom, NNAV)的免疫调节作用及机制。 方法：通过碳粒廓清实验，ELISA检测血清补体C3，自然杀伤(Natural killer,NK)细胞杀伤实验，血清抗绵羊红细胞(Sheep red blood cell, SRBC)抗体IgM测定实验，二硝基氟苯(Dinitrofluorobenzene, DNFB)诱导迟发型超敏反应(delayed-typeof hypersensitivity, DTH)以及CCK-8法检测淋巴细胞增殖实验检测NNAV对正常小鼠非特异性免疫功能与特异性免疫功能的影响;通过流式分析脾脏T淋巴细胞亚型，ELISA检测血清IgG与IgM含量，对脾脏切片进行H&E染检测NNAV对地塞米松诱导免疫低下小鼠免疫功能的影响;通过CCK-8检测细胞活力，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色检测T细胞周期，二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CarboxyFluoroscein Succinimidyl Ester, CFSE)染色检测CD4与CD8T细胞增殖，ELISA检测淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4与IL-17含量，流式分析Th1、Th2与Th17分化对NNAV免疫调节机制进行探究。 结果：在正常机体，NNAV (20μg/kg)能显著增加碳粒廓清指数α;NNAV (20μg/kg、40μg/kg)对补体C3的生成具有促进作用;NNAV (40μg/kg、80μg/kg)对NK细胞的杀伤作用呈剂量依赖性增强作用;NNAV (40μg/kg、80μg/kg)促进抗SRBC抗体IgM的生成，对B细胞的增殖也有促进作用，与剂量呈正相关;NNAV(40μg/kg、80μg/kg)显著抑制迟发型超敏反应造成的耳廓肿胀，对T细胞增殖呈剂量依赖性抑制作用。在地塞米松造成的免疫低下机体，NNAV (80μg/kg)对CD4与CD8T细胞均有抑制作用，且对CD8T细胞的抑制作用强于CD4T细胞，使CD4/CD8比例恢复至正常水平;NNAV (20μg/kg、40μg/kg)对地塞米松造成的IgG、IgM降低有明显的逆转作用，对生发中心(Germinal Center, GC)的形成也有恢复作用。机制研究结果显示，在不影响细胞活力的前提下，NNAV (80μg/kg)可将T细胞周期阻滞在G0/G1期，对CD4与CD8T细胞增殖均有抑制作用，ELISA结果显示NNAV能促进IFN-γ与IL-4的生成，抑制IL-17的生成，流式结果也证实NNAV对Th1与Th2的分化有促进作用，对Th17的分化有抑制作用。 结论：NNAV能够通过促进Th1与Th2细胞的分化来增强固有免疫与体液免疫功能，NNAV对细胞免疫的抑制作用主要集中体现在对CD8T细胞与Th17细胞的抑制作用。